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①各标志基因进入F-细胞中时间不同,达最高水平的时间也不同; ②随时间的推迟,某个基因的重组率增加;一定程度后,重组率便不再增加。 如:10’tonr首次出现, 15’时40%、25’后80%。 ∴Hfr中基因是按一定的线性顺序依次进入F-菌株的。 大肠杆菌:Hfr+ thr+leu+ azirtonr lac+gal+×F- thr-leu- azis tons lac-gal-的结果 标记基因 转入的时间(分钟) 频率 thr+ 8 100(经选择的) leu+ 8.5 100(经选择的) azir 9 90 tonr 11 70 lac+ 18 40 gal+ 25 25 下图为以基因出现的时间为标准 → 作出E. coli的遗传连锁图。 4.用一种大肠杆菌的不同Hfr菌株进行中断杂交实验,作出连锁图,其基因向F-细胞转移的顺序不同。 Hfr类型 原点 基因转移顺序 HfrH 0 thr pro lac pur gal his gly thi 1 0 thr thi gly his gal pur lac pro 2 0 pro thr thi gly his gal pur lac 3 0 pur lac pro thr thi gly his gal AB312 0 thi thr pro lac gur gal his gly 转移的顺序是不是随机?例如:thr thi gly 。 Hfr1和HfrAB312菌系的中断杂交试验及其连锁图: 差异:不同Hfr菌株转移的原点(O)和转移方向不同。进一步说明了F因子和细菌染色体都是环状。见上图。 1.3.2.4 重组作图: 两基因转移时间间距<2分钟时,中断杂交法的图距不够精确,应采用传统的重组作图法。 例:二个基因紧密连锁: -lac-(乳糖不发酵) -ade-(腺嘌呤缺陷型) 基因间重组频率 -两个位点间的时间约为1分钟,约相当于20%的重组值 基因间重组频率 1.3.3 性导(sexduction): 1.性导:指接合时由F’因子所携带的外源DNA整合到细菌染色体的过程。 F因子整合过程:可逆,发生环出时,F因子又可重新离开染色体。见右图 Adelberg和Burns(1959): *F因子偶尔在环出时不够准确,会携带出染色体上的一些基因,这种因子称为F’因子。 *F’因子携带染色体的节段大小:从一个标准基因到半个细菌染色体。见下图 1.3.3 性导(sexduction): F’因子使细菌带有某些突出的特点: ⑴F’因子转移基因频率极高,如同F+因子转移频率; ⑵F’因子自然整合率极高,并且整合在一定的座位上。见右图。 ∵ 携带与细菌染色体一样的同源区段;而正常F因子可在不同座位整合 1.3.3 性导(sexduction): 雅科和阿代尔伯格发现: 特殊的Hfr菌株能把lac+ 等位基因高频率地转移到Flac-受体中。 因为: ①lac基因位于远端,中断杂交实验中只有1/1000重组率; ②由F携带lac+ 基因进入受体后可在lac位点上形成部分二倍体Flac+ / lac-。 性导在大肠杆菌遗传研究中的作用: 1.利用不同基因在一起的并发性导的频率来作图; 2.通过性导产生部分二倍体,确定等位基因位置、显隐性关系提供了重要方法; 3.性导形成的部分二倍体可用作互补测验,确定两个突变类型是否属于同一个基因。 并发性导(co-sexduction):是建立遗传图的另一手段,两个位点必须密切相连才能处在同一个F’因子上。 获得两个位点间重组率 每个片段的连锁群性导作图法与转导作图法相同。 2 3 5 6 7 8 9 10 38 11 1.2.2 转导(transduction): 例:黎德伯格与津德(1951)发现鼠伤寒沙门氏菌中转导现象。 ⑴将两个沙门氏菌的营养缺陷型进行杂交: phe-trp-tyr-met+his+×phe+trp+tyr+met-his- ↓混合培养 在基本培养基发现原养型的菌落(频率为1/105) ⑵产生上述结果的原因: ①是否属于回复突变? 高频率出现不可能是回复突变。 ②是否属于接合、性导? 重组体,排除由于接合或性导而产生基因重组可能性。 ③是否属于转化? 结果表现为不受DNA酶的影响,排除了由于DNA片断通过滤片经转化实现基因重组可能性。 ⑶唯一可能的结论是:这种重组通过一种过滤性因子实现。 这种过滤性因子称为FA,不受DNA酶的影响。FA为噬菌体P22(溶源性)。 1.2.2 转导(transduction): 1.2.2.1 普遍性转导(generalized transduction) 1.作用:可转导细菌染色体组的任何部分。 转导颗粒:把染色体细菌片段包
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