金雀异黄素抑制人结肠癌细胞增殖及分子机制研究-卫生毒理学专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共 同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 储签砖擀啸幽嫩月现 关于学位论文使用授权说明 本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论 文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者签名栅师签 Et；II：。。西对月驾日 金雀异黄素抑制人结肠癌细胞增殖及分子机制币开究磷究生：童玲玲 金雀异黄素抑制人结肠癌细胞增殖及分子机制币开究 磷究生：童玲玲 导师：李米阳教授 枣文摘要 匿的；鼹察袅雀异黄索(Genistein，GEN)慰体步}培养人结肠癌缨胞系(SW-480) 细胞增殖抑制作用，探讨GEN抗肿瘤作用机制。 方法：髂势培养人终骚癌缎艟系(SW-480)纲毙，M暇魄色法测定GEN对 SW-480细胞增殖抑制作用。细胞计数法测定GEN对SW-480细胞生长的影响： Pl染色滚式绥藏术(FCM)分摄GEN终麓屠静缀麓蠲赣分瘫帮弼亡奉；免疫 细胞化学sP法检测GEN对SW-480细胞NF书B、Bcl．2、Bax、COX2蛋白表达 静影确；Western blot检铡GEN对ERKl／2磷酸纯水平静影躺。 结粱： 1．MTI比色法测定结果显示，GEN(6．25、12．5、25、50、100¨mol／L)对 体外培养SW480缎胞具有抑制增熬作用，璧剂量的依赖性(p0．05)。 2．细胞计数法测定显示，GEN 50I．trnol／L对SW480细胞24h其抑制攀为 28％，48h其耱割攀隽50％，第6天英搀铡零为86％。慰SW480缬您璞蓬翔裁 作用呈时间依赖性。 3．流式缨庭术分疆显示GEN佟蒡j予SW480缬施，鑫现Gz／M期疆潞。 4．免疫细胞化学法检测结果显示，GEN50、1001Lmol／L对SW480细胞，对 照缀bcl一2、NF-KB、COX表达呈强阳性，而处理缀呈阴性或弱阳性，阳悭率 明鼹降低，处理组平均灰盛馕较对照组明曼离(p《0．05)。对照组Bax呈蜗性 或弱阳性，而处理缀呈强阳性，阳性率明暇增加，处理组平均灰度值较对照组 明鼹低(蛰0．05。 5．Western Blot结果盥示：6．25、12．5、25、50、100p．mol／L的GEN处理 SW480缨熬，呈浓凌依赣瞧撩裁天绦肠癌缨慈ERKl／2蛋鑫磷酸亿。(PG．05)。 结论： 1．金雀羚黄素j}雩人结弱瘸细麓黎(SW-480)绥胞增殖鼓有抑制作用。 2．金雀异黄素抑制SW-480细胞生长作用与抑制ERKl／2蛋白磷酸化诱导 2．金雀异黄素抑制SW-480细胞生长作用与抑制ERKl／2蛋白磷酸化诱导 G2／M期阻滞和细胞凋亡相关。 3．金雀异黄素通过下调SW-480细胞NF—KB、Bcl．2和COX2蛋白的表达， 上调Bax蛋白的表达，降低Bcl．2／Bax比值，促进细胞凋亡，抑制肿瘤的生长。 关键词： 结肠肿瘤 金雀异黄素 细胞周期 凋亡 ERK 2 Inhibition Inhibition of human colorectal cancer cell proliferation by Genistein and its molecular mechanism ABSTRACT Objective：To investigate the proliferation inhibitory effect of Human colorectal cancer cell line SW-480 by Genistein in vitro and tO explore its antitumor molecular mechanism． Method：Human colorectal cancer cell line SW-480 was cultured in vitro and used to perform experiments．The antiproliferative effects of Genistein were examined by 3一f4，5一dimethylthiazol一2一y1]5一diphenyl tetrazolium bromid(M鞭)assay in vitro．The influences of Genistein on cell g