金黄色葡萄球菌DNA抗肿瘤实验研究-呼吸内科专业论文.docxVIP

博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 金黄色葡萄球菌DNA抗肿瘤实验研究 摘要 研究背景 肺癌是全世界恶性肿瘤致死的首要因素“1，但至今尚无特异有效 的治疗方法来根治肺癌。随着医学技术的迅猛发展，免疫治疗成为当 今研究的热点，是继化疗、放疗和手术治疗之后治疗肺癌的第四大疗 法。 金黄色葡萄球菌作为一种革兰阳性球菌，能分泌30多种蛋白质， 包括酶、免疫毒素、细胞毒素以及无数的细胞相关因素促进粘附和逃 避宿主的免疫监视乜11，当机体感染了金黄色葡萄球菌后，这些分泌 的蛋白质能够刺激机体产生大量的细胞因子，如白介素一2、白介素一8、 干扰素、肿瘤坏死因子等陆“；这些细胞因子，在非特异性免疫应答、 增强抗原特异的免疫应答及调控免疫应答类型(Thl或Th2型)等方 面发挥重要作用盯“。金黄色葡萄球菌肠毒素作为一种超抗原可不经 APC处理，以完整的蛋白质分子形式直接与APC膜上的MHC—II类分子 及T细胞抗原受体分子的CDR4区相结合，特异性地激活特定VB片段 的T细胞阻3，过量诱生TNF一Ⅱ、IL-2、IFNl、IL-1等细胞因子““， 而这些细胞因子又具有抗肿瘤作用“’蚓。目前在临床上使用的新型 抗肿瘤生物反应调节剂——高聚金葡素就是从一种低毒高聚集价的 金黄色葡萄球菌的代谢物中提取的一种活性物质，是世界上第一个超 抗原抗癌生物制剂“ 。 DNA免疫或DNA疫苗是20世纪90年代发展起来的一项崭新的免 疫技术，由Tang口1等首次报道，随后引起了广泛的关注。大量的疫苗 研制工作如抗流感疫苗、HIV疫苗、乙肝病毒疫苗和肿瘤相关抗原疫 苗等相继报道，被称为“第三次疫苗革命”，是继减毒疫苗、基因工 程疫苗之后的第三代疫苗。它通过基因重组技术，将编码有特定蛋白 抗原的裸露DNA注入体内，表达出抗原蛋白，诱导其抗体的表达及T 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 细胞依赖的细胞裂解等一系列特异性免疫应答。DNA疫苗具有免疫刺 激活性的结构基础是CpG基序(CpG motif)。 DNA疫苗的免疫学活性包括：l、刺激多种免疫细胞活化，包括B 细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、NK细胞等。2、 诱导多种细胞因子产 生，如IL-6，IL一12、 IFN—Y、TNF—CI等““。DNA疫苗具有诸多传 统疫苗没有的优越性，它能激发机体同时产生高效持久的体液免疫和 细胞免疫，制各简单且纯度很高，进入体内后既不插入染色体，也不 复制，因此比较安全。所以，DNA疫苗的研究倍受关注，迄今已广泛 应用于许多感染性疾病的防治和肿瘤治疗的研究中，并取得长足的进 展，已有人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、轮状病毒、 疟疾、双歧杆菌、大肠杆菌等的DNA疫苗进入临床试验。 由于细菌DNA能够刺激多神免疫细胞活化，诱导多种细胞因子产 生，在非特异性免疫应答、增强抗原特异性免疫应答及调控免疫应答 类型(Thl或Th2型)等方面发挥重要作用“””，且细菌DNA具有抑瘤 作用。 “。而金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus，简称 S．aureus)是一种革兰阳性球菌，是最常见的化脓性球菌，也是医院 交叉感染的重要传染源旧3。但目前对于金黄色葡萄球菌DNA是否具有 免疫调节和抗肿瘤作用，尚不清楚。故本实验纯化提取其染色体进行 体内抗肿瘤的动物实验，检测其免疫学指标，并探讨其免疫作用机制， 为细菌DNA应用于抗肿瘤免疫治疗增添新内容。同时，我们对肺癌模 型的制造进行了初步的研究。 一：金黄色葡萄球菌DNA对小鼠免疫功能的影响 目的：探讨金黄色葡萄球菌DNA对正常小鼠免疫功能的影响。方 法：纯化提取金黄色葡萄球菌DNA并注射于小鼠腹腔内，测定脾脏自 然杀伤(NK)细胞、腹腔巨噬细胞(M由)的杀伤活性以及小鼠血清 内IFN—Y、TNF一Ⅱ的活性。结果：1、实验组NK／M巾细胞的杀伤活 性分别为：75．0±13．9％，74．7±6．9％。对照组分别为：53．2±17．4％， 53．8--+8．8％，两组数据各自比较均有显著性差异(PO．01)。2、实验 组IFN-Y、TNF—Cl的活性分别为120．33士45．32pg／ml，28．77± 8．5lpg／ml，对照组分别为125．25±27．57pg／ml，25．40±9．68pg／ml， 两组数据各自比较无显著性差异(PO．05)。结论：l、金黄色葡萄球 菌DNA可提高小鼠NK／M由细胞的杀伤活性，但对小鼠血清内IFN—Y、 TN卜CI的活性无显著影响。2、金黄色葡萄球菌DNA对正常昆明小 Ⅱ‘ 博士学位论文鼠具有免疫调节功能。 博士学位论文 鼠具有免疫调节功能。 二：金黄色葡萄球菌DNA抗肿瘤实验研究 目的：探讨金黄色葡萄球菌DNA抗肿瘤免疫的效果及其免疫机 制。方法：纯化提取金黄色葡萄球菌染