金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药的实验研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

摘要目的：了解金葡菌对万古霉素的耐药现状；体外诱导万古霉素耐 摘要 目的：了解金葡菌对万古霉素的耐药现状；体外诱导万古霉素耐 药金葡菌；分析金葡菌凝固酶活性及其他生物学性状改变与万古霉素 耐药的关系。 方法：1．调查金葡菌对万古霉素的耐药情况。对132株临床分离 的金葡菌分别进行2肛g／ml、4pg／ml万古霉素脑心浸液琼脂生长试 验，并用菌群分析法筛选对万古霉素异质性耐药金葡菌。4肛g／ml万 古霉素生长试验阳性菌株用AP—PCR进行基因分型。2．体外诱导万古 霉素耐药金葡菌。在体外用万古霉素对15株金葡菌进行诱导：诱导 过程中每隔5代进行菌种鉴定；诱导出耐药金葡菌后，分析耐药菌株 其他抗生素敏感性改变情况。3．分析耐药诱导过程中金葡菌凝固酶活 性及其他生物学性状改变情况。诱导过程中每隔5代测定金葡菌凝固 酶活性；检测诱导过程中金葡菌coa基因DNA相对含量有无改变；利 用SSCP和基因测序技术分析诱导前后金葡菌coa基因和spa基因序 列改变情况。 结果：1．金葡菌万古霉素耐药情况调查结果：62株(47．O％)金 葡菌能在含2pg／ml万古霉素的脑心浸液琼脂上生长，9株(6．8％) 金葡菌能在含4¨g／ml万古霉素的脑心浸液琼脂上生长，但其MIC皆 ≤2“g／ml。有1株金葡菌对万古霉素异质性耐药。9株菌株都能产生 稳定的AP-PCR谱型。2．体外诱导万古霉素耐药金葡菌结果：诱导出 3株对万古霉素中介耐药金葡菌；3株万古霉素中介耐药金葡菌对其 他抗生素耐药性也增加。3．耐药诱导过程中金葡菌凝固酶活性及其他 生物学性状改变情况：有6株(包括3株对万古霉素中介耐药)金葡 菌凝固酶活性降低。A18耐药株C08基因DNA相对含量下降，A56、 A59的coa基因和spa基因都检测到序列改变。 结论：1．未发现临床株中对万古霉素完全耐药或中介耐药的金葡 菌，异质性耐药金葡菌分离率为0．75％；在本地区尚无对万古霉素敏 感性降低的同源株的流行趋势。2．体外很难诱导万古霉素完全耐药金 葡菌；与万古霉素共孵育后金葡菌对其他抗生素敏感性也发生改变。 葡菌；与万古霉素共孵育后金葡菌对其他抗生素敏感性也发生改变。 3。金葡菌凝固酶活性下降、C0,8．基因DNA相对含量降低、C08．基因和 spa基因序列改变与万古霉素耐药可能有一定关系。 关键词金黄色葡萄球菌，万古霉素，耐药性 lI ABSTRACTobjective：The ABSTRACT objective：The aim ofthis study is to determine the situation of resistance in Staphylococcus aureus@aureus)to vancomycin，to induce vancomycin-resistantant S．aureus in vitro and to observe the changes of coagulase activity and other characteristics of S．aureus and their relationship witll vancomycin resistance． Methods：1．we investigated the prevalence of resistance in＆aureus to vancomycin．In the present study,132 S．aureus strains were studied by growing on brain-heart infusion(BHI)medium containing 2 pg／ml or 4 pg／ml vancomycin respectively．Heterogeneously vancomycin resistance Saureus(hetero-VRSA)were screened and identified by population analysis method．Those strains grew on Bill medium containing 4 pg／ml vancomycin were genotyped by arbitrarily primed polymerase chain reaction(AP-PC戳．2．Vancomycin-resistantant S．aureus(VRSA)was induced in vitro．Fifteen strains ofaureus were cultured on BHI medium containing vancomycin and the isolates were identified