金黄色葡萄球菌B型肠毒素的分离纯化及其单克隆抗体的制备-食品科学专业论文.docxVIP

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的分离 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的分离 纯化及其单克隆抗体的制备 食品科学专业 研究生朱俊友 指导教师李玉锋 摘要： 食品中的肠道致病菌是引起人类食源性疾病的主要原因之一，临 床症状主要表现为腹泻、呕吐，也是食物中毒的主要因素，是人类健 康的一大杀手。其中，金黄色葡萄球菌(Saphylococcus aureus)是人类 和某些动物的病原菌之一，常引起食物中毒。其致病力强弱主要取决 于产生毒素和侵袭性酶的能力，其中金黄色葡萄球菌耐热性肠毒素 SEB，是引起人类食物中毒和葡萄球菌胃肠炎的主要原因。 快速和自动化检验方法在应用微生物学领域还处于快速发展时 期，目前用于微生物检验的检测方法有很多，出现了一些快速检测致 病微生物的方法，到目前为止只有生物芯片技术能较好地满足人们对 检测致病微生物的快速、准确、简易等要求。由于基因与其所表达的 毒素蛋白之间有表达水平不对应等原因，单凭基因芯片检测结果是不 能完全反应出生物体内的蛋白质水平，因此，要想得到完整的生物信 息，其解决办法之一就是直接研究基因的表达产物一蛋白质。 本课题旨在制作出能应用于蛋白质芯片点印的SEB的单克隆抗 体，为蛋白质芯片在致病微生物的应用上做一些前期的工作。所做实 验课题主要内容包括金黄色葡萄球菌B型肠毒素的分离纯化及其单克 隆抗体的制备。选用金黄色葡萄球菌产毒标准菌株CMCC(B)26002， 采取玻璃纸覆盖琼脂平板的膜培养法培养产毒，毒素经预处理后，首 先利用羧甲基阳离子交换纤维素CM--32柱层析，对B型肠毒素进行 先利用羧甲基阳离子交换纤维素CM--32柱层析，对B型肠毒素进行 初步分离富集，然后依据分子筛原理按分子量大小经葡聚糖凝胶G一 75进一步纯化，只经两步细分级分离就获得了纯化的能应用于蛋白质 芯片的SEB。用分离纯化的SEB免疫BALB／c小鼠，然后取其脾细胞 与骨髓瘤细胞Sp2／0融合，再经过选育、检测、鉴定等步骤，成功获 得了SEB’的单克隆抗体细胞，抗体特异性经酶联免疫吸附测定法检 验，单克隆抗体细胞特异性强。本课题的研究成果为蛋白质芯片技术 快速检测产肠毒素金黄色葡萄球菌奠定了基础。 关键词：SEB、致病菌、分离纯化、单克隆抗体、蛋白质芯片技术 The The Separation and Purification of SEB and the Making of SEB Monocional Antibody Food Science Master Zhu Jun-you Tutor Li Yu-feng Abstract： Enteropathogenic microorganism in food is the main factor of food poisoning disease，and its symptom is mainly diarrhea，vomit．It is harmful to human’S health．Staphylococcus aureus is one of the pathogens for human being and some animals and it can bring food poisoning．Its pathogenicity rest with the ability to secrete pathotoxin and zymins，and heat—resistant Staphylococcus aureus enterotoxin B is the main causation that results in food poisoning and Staphylococcus gastritis and enteritis． Fast and automatic test ways is on the quick developing period．At present，there are many test ways in pathogenic microbiology test and some new quick test ways appear,but，at present，only biology chip can meet well human being’S quick,veracious and simple demand for testing pathogenic microbiology．Moreover,gene doesn’t correspond to its expressive toxin protein；gene chip’S analytic result can not reflect protein’