解磷菌和相思根瘤菌高密度培养研究及相思根瘤菌16S rDNA序列分析-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

南昌大学硬士学位论文摘 南昌大学硬士学位论文 摘 要 相思作为豆科树种，其共生固氮作用日益受到重视。研究表明：在大叶相思 (Acacia auzicuJaeformis A．Cunn．)和马占相思(Acacia mangium Willd．) 吸收的氮素中，52％～66％来自根瘤菌的固氮作用。目前对相思研究多集中在固氮 共生体间的相互作用方面，对在共生体中发挥固氮作用的相思根瘤菌的优化培 养，则未有报道。利用微生物的解磷作用弥补土壤磷素营养的不足，已成为当前 国内外非常关注的研究课题。因此，本课题着重研究了相思根瘤菌及与它相关的 解磷菌优化培养条件，该研究结果为研制具有固氮、解磷功能的微生物肥料提供 了条件和基础。同对本课题对相思根瘤菌三个菌株进行了16S rDNA基因序列测 定与分析，以确定它们与其它根瘤菌的亲缘关系。 1)．绘制了相思根瘤菌AJ018、YM2和Mz菌株和解磷菌217菌株在4种培养基 中的∞值生长曲线，结果表明：它们都能在BSE培养基中较好的生长；应用正交 实验Lg(34)对AJOi8、YM2和Mz根瘤菌和217解磷菌的常规培养进行优化，获 得了它们的优化培养基，进一步绘制的生长曲线证明了优化培养基更利于菌株 的生长，且活菌数更多。 2)．通过对相思根瘤菌和解磷菌摇瓶发酵中种子菌龄、接种量、装液量、初始 pH值和摇床转速等工艺条件的研究，确定出摇瓶发酵的最优培养条件。同时217 解磷能力的研究也表明：菌体数量与pH值、解磷强度之间有着密切的关系。另外 用乙炔还原法测得它们的最高固氮酶活性表明：在AJOJ8、MZ和YM2三株菌株 中， Mz菌株的固氮能力最好，其固氮酶活性最高可达0．963 u g．mL～．d～； YM2 的固氮能力最差，其最高固氮酶活性仅为0．280 u g．mL～．d～。 3)．制作了相思根瘤菌Mz和217解磷菌8种固体载体的固体剂型，并比较其在 贮藏过程中的活菌数和存活率。结果表明相思根瘤菌Mz在这8种固体载体保存 效果较差，保存效果最好的是轻质碳酸钙，其活菌数和存活率分别为1．38×i05 和10．1％。而217解磷菌的8种固体载体保存效果较好，特别是高岭土、微细胞 滑石粉和轻质碳酸钙，但高岭土要优于微细胞滑石粉和轻质碳酸钙。 4)．测定了相思根瘤菌的16 S rDNA序列，将此序列与根瘤菌各已知种及相关种 的16SrDNA序列进行了比较，得到了系统发育树状图。在系统发育树状图中， AJOl8、MZ菌株与慢生大豆根瘤菌饵japonicum)、弗氏中华根瘤菌 相愚报癯菌和解磷菌高密睦培养研究及辐思报瘤菌16SrDNA亭确分辑(矗lJaoningens旬、埃尔坎慢生根瘤菌(业elkaniD亲缘关系较近，共同构成 相愚报癯菌和解磷菌高密睦培养研究及辐思报瘤菌16SrDNA亭确分辑 (矗lJaoningens旬、埃尔坎慢生根瘤菌(业elkaniD亲缘关系较近，共同构成 中华根瘤菌属(Brndyrhizobium)发育分支，在该分支内AJOl8菌株与 矗jnponicum和显liaoningense的模式菌株16 s r DNA相似性分别为95．1％、 96．1％，均大于95％；MZ菌株与且eikanii的模式菌株16 s r DNA相似性为98％。 因此，分离自相思根瘤菌的AJ018和Mz菌株应该属于Bradyrhizobiu掰属的一个 种，但YM2与所有已知根瘤菌属的亲缘关系较远，这是值得进一步研究的菌株。 关键词：相思根瘤菌；解磷细菌；培养基优化；固氮酶活性；解磷能力；剂型； 16s rDNA序列 Ⅱ 南昌A-学砸t-学位论文Abstract 南昌A-学砸t-学位论文 Abstract As a Leguminosae tree seed，Acacia has been increasingly attached importance to because of its accrete nitrogen fixation．Studies have shown about 52％一66％of the azote element originate from the nitrogen fixation of Rhizobium in Acacia auriculaeformis and Acacia mangium．Reseaches on Acacia have all concentrated on the interaction between both sides of nitrogen fixation，and there are no report on the optimized culvivation of Acacia Rhizobium,who exerts the fu