结核分枝杆菌Rv1272和Rv1273蛋白的功能研究-病原生物学专业论文.docxVIP

—j —j ／删f㈣必苏州大学学位论文使用授权声明 ／删f㈣必 苏州大学学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， 即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸 质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、 中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索。 涉密论文口 本学位论文属 在——年一月解密后适用本规定。 非涉密论文团 论文作者签名：重鳖堕 日 导师签名：．鱼兰垒聋日 1．一 1．一 结核分枝杆菌Rvl272和Rvl273蛋[J的功能研究 结核分枝杆菌Rvl272和Rvl273蛋[J的功能研究 中义摘要 中文摘要 目的 探索结核分枝杆菌尺vJ272和尺’，．『2刀基因编码蛋白与药物外排的关系 及研究其物质转运功能，为探讨结核分枝杆菌耐药分子机制提供实验支持。 方法 利用生物信息学方法分析尺vJ2力和Rv，2刀基因及其编码蛋白的结构， 采用PCR技术扩增这两个基因，并与pMF406质粒连接构建重组质粒，测序J下确 后，电穿孔法将重组质粒转入耻垢分枝杆菌mc2155。同时用pMF406空质粒电转 入mc2155做对照。对这两个蛋白进行亚细胞定位后，用试管法测定其对常用的九 种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimalinhibitory concentration，MIC)。另一方面，用 530Iull激发光和590nm散射光，显示菌体对溴化乙锭(Ethidi啪bromide，EB)吸 收的量，判断这两个基因是内排还是外排EB。然后构建菌株pMF．△Rvl273，进 一步验证这两个基因的功能。最后通过检测菌株生长对EB的敏感性，进一步验证 其功能。 结果经验证Rvl272和Rvl273为膜蛋白。通过测定发现与对照菌株相比， 含有这两个基因的重组菌株对所测药物的MIC无显著性差异，未发现膜蛋白 Rvl272和Rvl273在重组菌株中对所测药物的外排作用。与对照菌株相比，菌株 pMF406．Rvl272对EB的吸收没有显著变化。而菌株pMF406．Rvl273 EB的吸收 量远远高于对照菌株，菌株pMF．△Rvl273与对照菌株EB吸收量基本接近。在大 肠杆菌和耻垢分枝杆菌中，含有Rv，2刀和RvJ2刀重组质粒的菌株与对照菌株相 比，菌体生长均受到抑制。 结论Rvl272和Rvl273蛋白为膜蛋白，未发现其与结核分枝杆菌耐药之间 的直接关系。Rvl272蛋白可能没有物质转运功能，而Rvl273蛋白可能是一个向 内的物质转运泵，而且其转运依赖ATP的水解供能。 关键词 结核分枝杆菌；Rvl272；Rvl273；MIC；EB吸收；生长抑制；ATP 水解 作 者：程旭红 指导教师：赵英伟 副教授 Abstmct Abstmct The mnc“on research ofM旧曲口c陀，fl删胁6P圮”，∞括with Rvl272卸d Rvl273 The function research of坳cD6口c纪厂f甜聊砌6P彤“肠s括with Rvl272 and Rvl273 Abstract Objective Study on the relationship of two proteins coded by J均佗D6口c胞，．j册2 ，z，6P彤“伽捃尺VJ272RVJ2刀with d11Jg emux and research other aSpects of the mnction of them． Methods Their s仇Jctures were锄alyzed by bioinfonnatics．The似o genes were PCR锄plified and cloned int0 expression Vector pMF406 to generate tlle recombinant plasmids followed by sequence confi珊ation． The Verified recombinants Were transfo肌ed into朋：跏馏忉口，括mc2l 55．ARer investigation the subcellular localiz