第九章 临床专用生化分析仪分析技术.ppt

【展望】 未来临床检验仪器发展的方向： ①仪器设计机器人化。从送入标本、条码输入、完成检测、数据存储输出、连接网络, 由计算机控制仪器一次完成,速度更加快捷。 ②仪器模块化。仪器采用先进的控制技术, 按照模块化结构设计开发，形成一个高质量多功能的检验系统。 ③即时床旁检验仪器。仪器向携带便捷、无需专业人员操作、结果即时可得的“即时检验”或“床旁检验”仪器方向发展。 返回章目录 (二)影响电泳的因素 1.待分离物质的性质 一般来说，粒子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。 2.缓冲液的性质 （1）溶液的pH值：决定了待分离生物分子的解离程度，影响其带电性质、净电荷量。 （2）缓冲液离子强度一般在0.02～0.20mol／kg之间。 3.电场强度 电场强度也称电位梯度，它是指单位长度的电位降（V/cm）。电压越高，电场强度越大，迁移率越大，带电粒子移动越快。 4.支持介质的性质 包括支持介质的黏性吸附对泳动的阻碍作用，支持介质的分子筛和电渗作用。 此外，温度升高时，介质黏度下降，分子运动加剧，引起自由扩散加快、区带变宽和分辨率下降。 二、电泳仪的分类和基本结构 （一）电泳技术的分类 1.依据工作原理的不同分 移动界面电泳、区带电泳(zone electrophoresis)、稳态电泳或称置换电泳等。 2.依据有无支持物分 自由电泳和支持物电泳（区带电泳）。 3.依据电源控制的不同分 恒压电泳、恒流电泳、恒功率电泳。 4.依据自动化程度的不同分 手工操作、半自动电泳、全自动电泳、全自动电泳分析系统。 其他分类方式 依据支持载体的装置形式，区带电泳可分成水平平板电泳、垂直板状电泳、垂直柱状电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细管电泳等。 （二）电泳仪的基本结构 1.手工电泳仪 自动化程度低，其电源、电泳槽，以及电泳条带分析装备(或扫描仪)三部分的结构分离，加样、电泳、电泳后的染色和脱色等均需手工操作，人工设置参数完成电泳。 2.自动电泳分析仪 将电源、电泳槽、烘箱、染色缸等组合在一起，采用计算机对电泳过程进行控制，部分乃至全部操作由电泳仪完成； 依据自动化程度分半自动或全自动电泳仪。 全自动电泳仪组成 ①迁移／烘干／培养模块、②染色／去色／烘干模块、③键盘、荧光屏、④电源装置、⑤PC主板等组成。 全自动电泳仪外型图 三、自动电泳仪的使用和保养 (一)自动电泳仪的操作使用 自动电泳仪就是模拟手工电泳的过程，支持物准备、加样、搭桥、电泳（迁移）、固定染色、漂洗、脱色、烘干、扫描、计算、打印等依次按程序自动进行。 光密度扫描仪的操作同样全部程控。 （二）自动电泳仪的保养 每天保养的重点应当是电极的维护，每天电泳工作完成后，应当用干滤纸擦净电极，避免缓冲盐沉积于电极上或酸碱对电极的腐蚀。 每月保养的重点应是扫描系统的比色滤镜及光源。 四、电泳分析的质量控制 （一）电泳分析前质量控制 1.电泳分析方法的选择 在进行电泳分析前，加强实验室与临床医生的沟通，宣传实验室所开展的电泳技术及应用，全面了解电泳仪的结构和原理、电泳结果的意义，合理使用电泳分析方法。 2.标本的采集与保存 （1）标本采集：宜采集新鲜血液，分离血清作为电泳标本；避免标本溶血，否则导致电泳分析异常。脑脊液(CSF)标本也应以新鲜采集为最佳；在做CSF免疫固定电泳时，必须是对同一病人同时采集CSF标本和血清标本。尿液标本以新鲜的晨尿为佳。 （2）标本保存：不能立即进行电泳分析的标本血液，应先分离血清，再保存。血清、脑脊液和尿液标本，在2～8℃冷藏保存可稳定1周，-20℃冰冻至少可保存1个月，-40℃保存可长达5年。如血清标本加入0.2g／L的叠氮钠，冷冻保存的稳定性更好。 3.电泳试剂的保存 应遵照试剂使用说明书的要求保存电泳试剂，避免因电泳试剂产生误差。 大多数厂家的电泳载体使用的是琼脂糖凝胶，其保存期至少在半年以上。 凝胶片通常在干燥的室温条件下保存，具有生物活性的试剂(如抗体、酶等)需严格按要求保存，其他配套保存试剂应在有效期内使用。 （二）电泳分析中的质量控制 1.标本准备和使用 ①标本是否需要稀释或浓缩，应根据不同电泳要求而定。一般来说，血清蛋白电泳标本不需稀释；但免疫固定电泳标本一般需要稀释；尿液电泳分析时，如果尿中蛋白的浓度达不到15 g／L～20g／L，应对尿标本进行浓缩处理。 ②由于冷冻后的血清标本有时会变得黏稠或混浊，影响血清的扩散，所以冷冻的标本在电泳分析前要置室温平衡。 ③由于冷冻标本蛋白或脂蛋白可能降解，解冻后应予以标记，以便在结果分析时观察是否存在β-脂蛋白向阴极漂移；越陈旧的血清标本，电泳时这种漂移更明显。 ④标本量的要求尽可能做到严格和精确，否则所定出的区带可能不一致或不清。 2.电泳操作 自动化电泳与手工法电泳