课件：金黄色葡萄球菌检验与计数.ppt

公式一的使用范围： ---最低稀释度平板的菌落小于20 cfu，计数该稀释度平板上的典型菌落； ---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，但上一稀释度平板上没有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落； ---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落，其平板上的菌落数不在20 cfu～200 cfu之间，计数该稀释度平板上的典型菌落； 公式一 T=AB/Cd T:样品中金黄色葡萄球菌落数； A:某一稀释度典型菌落的总数 ； B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 ； C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数； d:某一稀释度。 公式应用例一 样品稀释度 10－1 10－2 典型菌落数 66，64 6，6 用于做血浆凝固酶菌落数 5 5 血浆凝固酶阳性菌落数 4 4 公式一： T=AB/Cd T=65×4÷5÷0.1=520 高、低稀释度平板均有典型菌落，但其中高稀释度二平板的菌落数均不在20~200之间，选择低稀释度的平板进行计数。 N=∑T/1.1d ∑T：两个稀释度平板上确认的金黄色葡萄球菌菌落总数之和； d：稀释因子(第一稀释度)。 公式二的使用范围：平板菌落数均在20 cfu～200 cfu之间。 公式引用于ISO 6888-1:1999(E) 公式二 公式应用例二 样品稀释度 10－1 10－2 典型菌落数 185，180 20，22 用于做血浆凝固酶菌落数 5 5 血浆凝固酶阳性菌落数 3 4 公式二： N=∑T/1.1d T1=183×3÷5=110 T2=21×4÷5=17 ∑T= T1+ T2=110+17=127 N=∑T/1.1d=127÷1.1÷0.1=1200 所有稀释度平板合计菌落数均在20~200间： 结果报告 单位：cfu/g或者cfu/mL；若T或者N为0，报告1d-1 cfu/mL(g)。 第二法 MPN法 MPN检验程序 25g(mL)检样+225mL稀释液， 匀质 10倍系列稀释 选择3个适宜稀释度的样品匀液，吸1mL样液，每稀释度各接种3管胰酪胨大豆肉汤，样品的最高稀释度，能达到获得阴性终点 36±1℃ 45~48h 接种Baird-Parker平板 血浆凝固酶试验 45~48h 36±1℃ 查MPN表 报告结果 接种和培养 根据对样品污染状况的估计，选择2~3个适宜稀释度的的样品匀液(液体样品可包括原液)，每个稀释度分别吸取1ml接种到胰酪大豆肉汤管，每稀释度接种3管。36℃±1℃培养45~48h。 用接种环从有细菌生长的各管中，移取1环分别接种于Baird-Parker平板36℃±1℃培养45~48h。 确认典型菌落，并从典型菌落中至少挑取1个菌落做血浆凝固酶试验。 结果报告 计算血浆凝固酶试验阳性菌落对应的管数，查MPN检索表。 结果报告： MPN/g或MPN /mL 注意要点 MPN法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品。 “样品的最高稀释度，能达到获得阴性终点”的理解： --尽可能避免1100MPN/g或ml的出现。 --方便MPN表的查找。 第三法PetrifilmTM测试片法 适用范围 PetrifilmTM测试片法适用于肉及其制品，奶制品等。 PetrifilmTM测试片法检验程序 检样25g(mL)+225mL稀释，匀质，10倍系列稀释 选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入纸片 36±1℃ 24±2h 判读 没有菌落 只有典型紫红色菌落 将所有紫红色菌落计数为金黄色葡萄球菌 除典型紫红色菌落外其他颜色的菌落 加入确认反应片， 36±1℃，培养1~3h 有粉红色菌晕的菌落计数为金黄色葡萄球菌 报告 第三法 PetrifilmTM测试片法 金黄色葡萄球菌PetrifilmTM测试片，含具有显色功能、经改良的Baird-Parker培养基，对金黄色葡萄球菌的生长有很强的选择。金黄色葡萄球菌在测试片上生成为暗紫红色的菌落，可以直接完成鉴定和计数。 金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片 金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片含有显色剂和耐热去氧核糖核酸(DNA)，金黄色葡萄球菌可生产耐热DNA酶，此酶与反应片上的显色剂反应，形成粉红色环。而其他细菌因不产生耐热DNA酶没有该反应。但在葡萄球菌属中，猪葡萄球菌、中间葡萄球菌也会产生阳性反应。 计数与结果报告 菌落计数: 到培养时间应立即计数，可目视、或用放大镜辅助计数； 选取菌落数在15~150之间的测试片作为计数标准。 选择菌落数在15~150之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之； 如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15， 则计数稀释度最低的测试片上的菌落数乘以