肿瘤血管生成的分子机制常用研究方法ppt课件.ppt

共聚焦显微镜的分辨率超过普通光学显微镜，染色过程简便，可以在活细胞上进行无创伤性的染色，最大程度地维持细胞的正常形态。多种自发性的荧光染料，已被广泛地用于诸如RNA、DNA细胞核、线粒体、内质网、肌动蛋白、细胞膜等结构的标记。运用免疫荧光技术，将不同波长的两三种荧光物质标记在内部不同结构的相应抗体上，以这几种荧光物质特定的光谱特性选择激发光和滤光片，则可以观察到细胞内部各结构间的毗邻关系。 共聚焦显微镜生成厚度小于0.2微米的依次相连的光学切片，即使较厚的组织的三维数据也可被计算机获取，运用适当的图像分析软件，可以测量并确定所观察结构的表面特征，体积等参数，为相互结合定量测量提供了新手段。  激光扫描共聚焦显微镜可以将各层面的微血管图像进行三维重建和处理。从而，可以分析微血管的三维立体特征及其空间关系。 8.血管内皮迁移实验 目前，对血管内皮细胞迁移的影响，已经有很多有效的测定方法。其中以改良的Boyden Chamber 或Transwell 法最常用。这些方法均是通过观测穿过一定孔径(如8 μm) 硝酸纤维素薄膜的细胞数量,确定细胞迁移能力。 8.1 Boyden Chamber 实验: Boyden室由两层组成,两层之间为胶原包被的多孔的多聚碳酸盐滤膜;血管内皮细胞放于上层,同时加入待测药物,共同培养6h后,除去上层的细胞,下层细胞用甲醇固定, HE染色,光镜下计算