金色链霉菌发酵条件优化及高产菌株选育的新方法-遗传学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士毕业论文金色链霉菌发酵条件优化及高产菌株选育的新方法 浙江大学硕士毕业论文 金色链霉菌发酵条件优化及高产菌株选育的新方法 摘 要 本文对金霉素(chlortetracycline，CTC)工业生产菌株3-119．3、H．CTC一5 和5．11．3在进行产抗性能比较的基础上，选定5．11．3为出发研究菌株，对该菌株 进行了培养条件优化，建立了高产菌株遗传选育的新方法，并对该方法的分子机 制进行了初步探讨。 培养条件优化结果显示，淀粉、酵母粉和无机盐的品种和浓度都对金色链霉 菌(Streptomyces aureofaciens)的产抗能力产生重要影响，a-淀粉酶的存在也会 影响金霉素发酵。不同菌株产抗性能比较分析显示，H-CTC-5和5．11-3在相同 发酵培养基中的效价比3-119．3高，稳定性好。5．11_3在各种培养基中都长势良 好，产抗能力强，是高产金霉素的优良菌株，并将其作为进一步研究的材料。 研究了培养温度对链霉菌孢子的紫外诱变正向突变率及突变幅度的影响。经 UV诱变的5．11-3菌株孢子悬浮液涂平板，分组置于适宜生长温度36℃、略低于 适宜生长温度的33℃，和接近抑制生长的胁迫温度30℃、39。C下培养。结果表 明：在30℃下培养获得的子代菌株，产CTC的正向突变子所占的比例和总体产 抗水平均明显高于其他温度组。正向突变子占总子代菌株数的百分率从36℃培 养组的29。85％提高到30C培养组的47．69％，丽39。C培养组的高产率也高于36 ℃培养组。用SPSSIO．0统计软件对各温度组下子代菌株产抗水平进行分析。结 果显示从30℃至39℃各个温度组下平均产抗水平分别为9724．9、8681．7、7914．6 和7667．2单位，方差检验F值为5．584，说明各个培养温度组间的突变子代产 抗水平差异显著。随机挑选各个温度组的菌株，进行同工酶电泳分析，结果显示 不同效价的菌株，其脂酶同工酶酶谱确实存在差异；用12对随机引物对出发菌 株与Uv诱变后的予代菌株进行总DNA的RAPD分析，同样表明，不同效价的 菌株在DNA多态性上也存在较大差异。这些表明，用诱变后的胁迫培养温度作 为突变形成的条件之一所获得的高产菌株确实在遗传背景上发生了可稳定遗传 的变化。因此这一方法较大幅度地提高了金色链霉菌5．11．3紫外诱变育种的工作 效率，同时也为链霉菌紫外诱变后突变形成机制的进一步研究提供了新途径。 关键词：金色链霉菌，金霉素，诱变育种，正向突变率，RAPD 3 浙江大学硕士毕业论文Studies 浙江大学硕士毕业论文 Studies on optimization of the fermentation condition with Streptomyces aureofaciens and novel method for selection of high-yielding chlortetracycline strain Abstract Based on the Fermentation results of Streptomyces aureofaciens named 5．11—3、 3-119—3 and H—CTC-5．We selected study the optimal condition for Chlortetracycline(CTC)fermentation of strain 5．11—3 and found hoveI method for selection of high—yielding CTC strain．Studies on the molecular mechanism of the novel method were carried out．The effect of inorganic phosphate、amylum and yeast flour On CTC biosynthesis were also studied． In order to improve the antibiotic-producing trait of strain 5．11—3，we exposed its protoplasts and spores to UV and isolated mutant stralns．The antibiotic’S titer of the mutant’S fermented broth was 4 times as hi【gh as the parent strain throt【曲OD440 data． And its high capacity for producing antibiotic remained stable afte