经门静脉骨髓间充质干细胞移植治疗肝硬化的研究-外科学专业论文.docxVIP

中山大学硕士论文 中山大学硕士论文 经门静脉骨髓间充质干细胞移植治疗肝硬化的研究 2、材料和方法 2．1肝硬化模型的制备(改良法)：Wistar大鼠105只作动物实验用，大鼠5只／ 笼，分笼饲养，第一天给大鼠皮下注射40％四氯化碳植物油溶剂，剂量为 0．5ml／lOOg。以后每隔3—4天给予同浓度的四氯化碳植物油容积皮下注射，剂 量为0．3ml／lOOmg。大鼠注射四氯化碳前用30％酒精灌胃，约3ml／只。 2．2 F344大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化和扩增 选用6周龄的F344大鼠大鼠5只采用贴壁法+密度梯度离心法分离、培养、扩 增MSC。共培养5代，取第三代MSC作实验用。 大鼠骨髓MSC的生长曲线测定 取生长良好的1、3、5代细胞，0．25％胰蛋白酶消化，1x104／ml接种于24孔板， 每天各取3孔消化计数，每孑L计数3次，计算均值，连续7d。培养时间为横轴，细胞 数为纵轴，描绘生长曲线。计算群体倍增时间：TD=t[1092／(109Nt—logNo)]，No SBNt分别代表接种后和培养t小时的细胞数。 2．3随机分组及实验计划： Wistar大鼠105只，其中5只留作空白对照组，100只作肝硬化实验模型用， 分笼饲养，由中山大学动物实验中心SPF级动