实验三 粗糙链霉（Neurospora crassa）的杂交（教材p.pptVIP

粗糙链孢霉生活史 * * 实验三 粗糙链孢霉(Neurospora crassa)的杂交（教材p133-9） 一、实验目的 1.?????? 通过分析粗糙链孢霉杂交后代的表现型，学习掌握顺序四分子遗传分析的基本技术； 2． 掌握着丝粒作图和相关基因定位的原理、技术。 粗糙链孢霉（Neurospora crassa） 属于真菌中的子囊菌纲 （n=7） 无性生殖:分生孢子 生殖方式 有性生殖:不同接合（交配）型： 二、 实验原理 A,a 或 mt+,mt- 有性生殖过程 1.分生孢子落在原子囊果的受精丝上 2.不同接合型的菌丝相接触，两核配对 ·受精→异核体→合核体 ·减数分裂、有丝分裂→8个核 ·子囊果 子囊 子囊孢子 ·适宜条件（60℃ 1-2h）， 子囊孢子萌发成新的菌 丝体 1.无性繁殖 2.有性繁殖 单倍体 生活周期短（10d左右） 个体小、生长迅速 易于培养（要求条件简单） 一次杂交可获大量后代 染色体结构和功能类似于高等生物 可直接观察减数分裂产物的排列次序 ·链孢霉材料的优点 ·着丝粒作图 凡是等位基因在减数分裂第一次分裂分离的子囊即为非交换型子囊；凡是等位基因在减数分裂第二次分裂分离的子囊即为交换型子囊。 概括来说， 1 实验材料： 粗糙链孢霉野生型菌株Lys+（接合型A），分生孢子为橘红色 粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型Lys-(接合型a)，分生孢子为白色 2 器具： 显微镜（或双目解剖镜）、接种环、载片 等 3 药品和培养基 （1）5%次氯酸钠（或5%石炭酸） （2）完全培养基（马铃薯培养基） (3) 无菌水(各小组自己灭菌—100ml三角瓶) 三、 实验用品 每小组适量玉米粒(如3人组:12粒)(已经浸泡软),用镊子等硬器破碎,平均分装于大试管(自己柜子里的)(每人一个管) +0.1g琼脂+10mL蒸馏水,混匀 插入3-4cm折叠多次的滤纸条 加上棉塞(或专用瓶盖) 操作前准备（用于链孢霉杂交） 在一个100mL三角瓶中装约50-60mL的蒸馏水 (玉米)杂交培养基准备 3. 将上述蒸馏水、培养基进行高压灭菌（培养基灭菌后不摆斜面） 四、 方法步骤 1 菌种活化（教师准备） ：两亲本均在28℃条件下培养5d左 右（完全培养基斜面，可添加赖氨酸 ） 2 杂交（本次操作） ：两亲本的少许菌丝或分生孢子同时接 种于杂交培养基上。 试管上贴上标签，注明杂交日期和实验者姓名。 25℃ ，一周左右有棕色原子囊果 ，2周左右便发 育为成熟子囊果 。 3 观察（两周以后） 培养物处理（少量无菌水冲掉分生孢子，倒三角瓶中煮沸） 载片制作（滴次氯酸钠→覆载片摁压→挤破子囊） 低倍镜观察，记录统计（注意是否出现基因转变）。 (p137-138) 偏早，孢子尚末成熟…白色 过迟，孢子全为黑色…交换型-非交换型分类困难 观察时期要掌握适当 *