烟草中NAC类转录因子基因的克隆及分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(11):2225-2233 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.11.003 烟草中NAC类转录因子基因的克隆及分析 1,2 2 1,2 2 戚元成 ，王菲菲 ，刘卫群 ，高美娟 1 2 （河南农业大学国家烟草栽培重点实验室，郑州 450002 ； 河南农业大学生命科学学院，郑州 450002 ） 摘要：【目的】克隆烟草 NAC 类转录因子基因，分析其序列特征和表达特性，为深入研究 NAC 类转录因子对 烟草打顶后根系的生长发育与烟碱生物合成之间的关系奠定基础。【方法】采用电子克隆结合RT-PCR 获得烟草 NtNAC-R1 全长 cDNA 序列，并进行生物信息学分析，用 pRESTB 原核表达系统进行该基因的原核表达。分别采用 RT-PCR和Northern杂交对烟草打顶前、后根尖组织中 NtNAC-R1 的表达模式进行分析。【结果】烟草NtNAC-R1 开 放性阅读框架长度为936 bp，编码311个氨基酸，具有NAC转录因子家族典型的保守结构域。系统进化分析表明， 该基因与矮牵牛 NAC 亲缘关系较近，属茄科植物特异 NAC 家族，在原核细胞中具有表达活性。该基因在烟草根中 的表达水平最高，在烟草打顶后 2—4 h 表达水平下降，随后上升。【结论】从烟草根尖组织中克隆了一个 NAC 转 录因子基因 NtNAC-R1，该基因在根系中具有高水平表达，在烟草打顶后 2—4 h 表达水平显著降低，具有响应烟 草打顶所导致的信号传递作用。 关键词：烟草；NAC类转录因子；RT-PCR；Northern杂交；组织表达 Cloning and Analysis of NAC Transcription Factor in Tobacco （Nicotiana tabacum L.） 1,2 2 1, 2 2 QI Yuan-cheng , WANG Fei-fei , LIU Wei-qun , GAO Mei-juan 1 2 ( Key Laboratory of National Tobacco Cultivation, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002; College of Life Science, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002) Abstract: 【Objective 】Cloning and characterization of tobacco NAC transcription factor gene could provide a foundation for studying its function and relationship between the root development and nicotine bio