G6PD基因G487A位点突变调控黑色素瘤增殖的分子-昆明医科大学.PDF

附件1 G6PD 基因G487A 位点突变调控黑色素瘤增殖 的分子机制 一、项目基本情况 候选人：朱月春，杨银峰，况应敏，田兴亚，胡滔， 张春华，蔡天池，唐琼玲，李丹怡，吕会茹， 任娜，张正 完成单位：昆明医科大学 推荐单位：云南省教育厅 项目所属学科：基础医学 任务来源：国家计划 计划名称和编号： 1.国家自然科学基金项目《红细胞G6PD 缺乏时溶血机理的 研究》，项目编号2000/01-2002/12、13 万元，主持 人田兴亚。 2.国家自然科学基金项目《云南阿昌族G6PD 基因扫描及其 克隆表达》，项目编号2005/01-2007/12、20 万元， 主持人朱月春。 3.国家自然科学基金项目《G6PD 与人皮肤黑色素瘤STAT5信 号传导通路的研究》，项目编号2009/01-2011/12、 20 万元，主持人朱月春。 4.国家自然科学基金项目《G6PD 和 NADPH 氧化酶调控人黑 色素瘤细胞 ROS 水平及 STAT5 活性的分子机制》，项目编号： 2012/01-2015/12、55 万元，主持人朱月春。 二、项目简介 葡 萄 糖 -6- 磷 酸 脱 氢 酶 （ Glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD ）是磷酸戊糖途的关键酶。人G6PD 基因位 于Xq2.8，G6PD 缺陷不仅引起新生儿黄疸、药物或食物诱导的急 性溶血和慢性非球形红细胞性贫血等血液病，还与其他疾病如疟 疾、肿瘤、糖尿病、艾滋病等有关。G6PD 缺陷是人类最常见的遗 传病之一，全世界患病人数超过 4 亿；云南省是G6PD 缺乏症的 高发区，并且G6PD 基因变异存在民族及地域性差异，是云南省 少数民族高发的基因变异之一。同时，云南也曾经是疟疾流行区， 而G6PD 缺陷常被认为是疟疾阳性选择的结果。 该研究结合云南地域和民族的特点，在上述4 项国家基金资 助下，应用生化与分子生物学技术，历时16 年，从云南少数民 族G6PD 基因变异及其溶血机理、到阿昌族G6PD 基因克隆表达及 酶动力学，重点研究了G6PD 在UV 密切相关黑色素瘤发生发展中 的作用与分子机制，构成了从溶血性疾病到肿瘤的G6PD 基因-功 能系列研究并获得了如下发现： 1.调查了云南阿昌族G6PD 缺陷的发病率，鉴定了云南阿昌 族G6PD 新单体型G6PD 487GA/IVS5-612(GC)，并从酶动力学 和分子建模阐明了G6PD 487GA 所致急性溶血的可能机理。 2.构建了稳定敲低G6PD、NOX4 表达的人黑色素瘤A375 稳转 细胞株（A375-G6PD Δ、A375-NOX4 Δ），构建了G6PD 过表达的 A375-G6PD Δ-G6PDWT 和 A375-G6PD Δ-G6PDG487A 稳转细胞株。 应用上述细胞模型，从体外内探讨了G6PD 在二酰胺和H2O2 等诱 导人黑色素瘤氧化应激中的作用及G6PD 调控人黑色素瘤增殖的 分子机制。 3.首次应用生化与分子生物学技术发现和鉴定了云南阿昌 族G6PD 新单体型G6PD 487GA ／IVS5-612(GC)，并从酶动力学 和分子建模阐明了该单体型所致急性溶血的酶动力学和空间结 构特点，以及对中缅边境疟疾患者红细胞补体受体1 （CR1 ）基因 G3093T、T520C 多态性的影响。 4.首次发现稳定敲低 G6PD 表达或 G6PDG487A 可降低人黑色素 瘤细胞的生长与增殖，导致细胞周期G1→S 阻滞，并增加对二酰 胺和H O 等诱导氧化应激的敏感性。 2 2 5.首次阐明G6PD 通过NOX4→ROS→c-SRC/SHP-2→STAT3 途 径调控人黑色素瘤增殖的分子机制。 三、候选人对项目的贡献情况 1.朱月春：主持3 项国家基金项目的实施，17 篇主要论文 的通讯作者（含8 篇代表性SCI 论文），作为第导师培养硕士研 究生8 人。 2.杨银峰：鉴定G6PD 487GA ／IVS5-612 （GC ）新单体 型，1篇代表性SCI 论文的第1