响应面法优化鸡血藤悬浮细胞产异黄酮的研究-江苏农业科学.PDF

— ５０— 江苏农业科学　２０１６年第４４卷第４期 邓志勇，曲芬霞，陈春岚，等．响应面法优化鸡血藤悬浮细胞产异黄酮的研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（４）：５０－５３． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０４．０１３ 响应面法优化鸡血藤悬浮细胞产异黄酮的研究 邓志勇，曲芬霞，陈春岚，陈兵兵，陈兴田，吴桂容 （贺州学院化学与生物工程学院，广西贺州５４２８００） 　　摘要：分别通过单因素试验和Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合试验来优化鸡血藤悬浮细胞产异黄酮的培养基组成和培养 条件。响应面法分析指出最佳工艺条件为蔗糖３９．３ｇ／Ｌ，水解酪蛋白３．９５ｇ／Ｌ，培养温度２２．７℃。在此优选工艺下， 鸡血藤悬浮细胞干质量和总异黄酮含量平均值分别为１１．６５ｇ／Ｌ和５．３４ｍｇ／Ｌ。总异黄酮含量与预测值５．４１ｍｇ／Ｌ 相差比例仅为２．６５％，说明该模型准确有效。响应面法优化大幅度地提高了鸡血藤悬浮细胞产异黄酮含量，为鸡血 藤异黄酮的深入开发提供了技术基础。 　　关键词：鸡血藤；悬浮细胞；异黄酮；Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合试验；响应面 　　中图分类号：Ｒ２８４．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０４－００５０－０３ 　　鸡血藤是豆科植物密花豆（ＳｐａｔｈｏｌｏｂｕｓｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓＤｕｎｎ．） 糖、０．１ｇ／Ｌ、３ｇ／Ｌ水解酪蛋白。细胞置于含 １００ｍＬ培养基 的干燥藤茎，主产广西，广东、云南也有分布。鸡血藤是补血、 的３００ｍＬ三角烧瓶中进行培养，于（２５±１）℃暗环境下以 活血的传统大宗中药材，具有促进造血功能、抗炎、抗氧化、免 １００ｒ／ｍｉｎ的速度摇瓶悬浮培养 １２ｄ，每组试验设置 ３个 ［１］ 疫调节、镇静催眠等药理作用 。此外，现代医学研究还发 重复。 ［２－３］ 现鸡血藤具有广谱的抗肿瘤和抗病毒活性 。药理学研究 １．３　试验设计 表明，鸡血藤药理作用的关键活性成分是异黄酮类化合物，主 １．３．１　单因素试验设计　在单因素试验设计中，在初始培养 要包括大豆黄酮、染料木素、刺芒柄花素和美皂异黄酮这４种 基（碳源：蔗糖 ３０ｇ／Ｌ；氮源：水解酪蛋白３ｇ／Ｌ；培养温度 ［１，４］ 主要的异黄酮活性成分 。中药材植物细胞的悬浮培养可 ２５℃）的基础上分别对碳源种类和浓度、氮源浓度和培养温 ［５］ ［６］ ［７］ 以生产异黄酮，如怀槐 、野葛 、大豆 等，但目前尚未有 度进行优化。试验依次进行，后续试验均应用前面试验得出 关于鸡血藤悬浮细胞产异黄酮的报道。近年来，鸡血藤野生 的最优结果。 资源面临枯竭，供需矛盾尖锐，因此开展悬浮细胞产鸡血藤活 碳源：使用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖及可溶性淀粉作为单 性成分的研究具有重要意义。本研究采用响应面法优化鸡血 独碳源，维持起始浓度均为３０ｇ／Ｌ，考察不同来源碳源对发酵 藤悬浮细胞的培养基成分，提高异黄酮活性成分的产量，为对 后细胞干质量及总异黄酮合成量的影响。在此基础上采用蔗 鸡血藤药效的深入开发提供基础。 糖为基础碳源，测试 １０、２０、３０、４０、５０、６０ｇ／Ｌ起始条件下对 发酵后干细胞总质量与总异黄酮合成量的影响。 １　材料与方法 氮源：调节ＭＳ培养基中的水解酪蛋白浓度分别为０．５、 １．１　试验材料 １、２、３、４、５ｇ／Ｌ，经过１２ｄ封瓶批次发酵后测量总细胞干质量 试验材料为鸡血藤愈伤组织，取自鸡血藤嫩叶部位，通过