乙酰乙酸β-羟丁酸和丙酮总称为酮体.PPT

一、实验目的 （1）了解脂肪酸的β-氧化。 （2）通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化的方法及原理。 二、实验原理 根据β-氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下： 2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2O CH3COCH3+3NaOI→CHI3+CH3COONa+2NaOH 剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。 NaIO+NaI+2HCl→I2+2NaCI+H2O?? I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。 三、仪器、材料和试剂 实验仪器 　 恒温水浴、微量滴定装置、解剖用具、玻璃器皿等。（仪器的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审定）。 　 实验试剂1、0.5%（m/V）淀粉溶液 2、0.9%（m/V）NaCl溶液3、0.5mol/L丁酸溶液 4、15%三氯乙酸溶液 5、10%氢氧化钠溶液 6、10%盐酸溶液 7、0.1mol/L碘溶液 8、标准0.01mol/L硫代硫酸钠溶液 9、1/15 mol/L pH7.6mol/L磷酸缓冲液 四、操作步骤与方法 2、酮体生成和沉淀蛋白质 取50ml锥形瓶2只，编号，并按下表操作。 3、酮体的测定 另取50ml锥形瓶2只，编号，并按下表操作。 混匀后立即用0.01mol/L标准的硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘，滴至浅黄色时，记录滴定A瓶与B瓶溶液所用硫代硫酸钠溶液的毫升数，并按下式计算样品中的丙酮含量。 4、计算 肝脏的丙酮含量（mmol/g）=（V对照-V样品）×cNa2S2O3÷6 式中：V对照为滴定对照所消耗的标准Na2S2O3溶液的体积，以ml为单位； V样品为滴定对样品消耗的标准Na2S2O3溶液的体积，以ml为单位； cNa2S2O3为标准Na2S2O3溶液的浓度（mol/L）。 3.计算 按下式计算100ml全血中所含的血糖质量（mg）。 m＝A1×C0÷A0÷0.1×100 式中：m：100ml血中所含的糖质量 C0：标准葡萄糖溶液浓度 A1：样品溶液吸光度 A0：标准溶液吸光度 五、注意事项 1、用新鲜肝糜进行实验，确保肝内酶活力。 2、注意滴定终点的控制，保证实验的准确度。 六、思考题： 1.为什么说脂肪酸β-氧化实验的关键是制备新鲜的肝糜? 2.什么叫酮体?为什么正常代谢时产生的酮体量很少? * * 脂肪酸的β-氧化 1、肝糜制备 （1）将家兔颈部放血处死，取出肝脏；用0.9%NaCl溶液洗去污血；用滤纸吸去表面的水分。 （2）称取肝组织5g置研钵中，加少量0.9%NaCl溶液，研磨成细浆。再加0.9%NaCl溶液至总体积10ml，得肝组织糜。 混匀，静置15min，过滤，滤液分别收集于2支试管中 2 - V(0.5mol/L丁酸溶液)/ml 3 3 V(15%三氯乙酸溶液)/ml 混匀，置于43℃恒温水浴内保温1.5h 2 2 V(肝组织糜)/ml - 2 V(0.5mol/L丁酸溶液)/ml 3 3 V(1/15 mol/L pH7.6mol/L磷酸缓冲液)/ml 2号（对照） 1号（样品） 锥 形 瓶 编 号 试 剂 3 3 V(0.5%淀粉溶液)/滴 3 3 V(10%盐酸)/ml 混匀，静置10min 3 3 V(10%氢氧化钠溶液)/ml 3 3 V(0.1mol/L碘溶液)/ml 2 - V(2号滤液)/ml - 2 V(1号滤液)/ml B号（对照） A号（样品） 锥 形 瓶 编 号 试 剂