土壤微生物总DNA提取方法的优化.PDFVIP

Research Paper 研究报告 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 52 (9):1143 － 1150 ; 4 September 2012 ISSN 0001 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ /journals． im． ac． cn / actamicrocn 土壤微生物 总 DNA 提取方法 的优 化 * ， ， 赵裕栋 周俊 何璟 ， 430070 华 中农业大学农业微生物学国家重点实验室 武汉 : 【 】 99% ， 。 摘要 目的 土壤 中未培养微生物约 占总量 的 这就意味着绝大多数微生物资源还未得到开发和利用 DNA ， DNA ， 本研究通过优化土壤微生物总 的提取方法 获得较高质量 的 为后期研究土壤微生物的 多样性及 。 【 】 DNA 构建大插入片段 的宏基 因组文库奠定基础 方法 通过综合 比较 已报道 的微生物 提取方法 的优缺 ， 。 ， SDS-CTAB 点 我们设计 出一种新的提取方案 对提取过程中的几个关键步骤进行 了优化 包括联合使用 和 ， ， PVPP DNA 。 3 溶菌酶一起来破细胞 利用氯仿 除蛋白 使用 柱纯化 等 比较分析 了优化后 的方法和 种 已报 DNA 、 。 【 】 DNA 道方法所获得 的土壤总 的产量 纯度及片段大小 结果 优化后 的方法所获得 的土壤 质量 明显 : 95 g DNA ，A260 / A280 A260 / A230 ，PCR 有所提高 每克土壤最高能提取 μ 和 比值更接近理想水平 扩增能够 ，DNA 100 kb 。 【 】 ， 得到 明显 的 目标条带 片段最大能达到 左右 结论 通过 比较分析 最终确立 了一种较理想 的 DNA ， 。 土壤微生物总 提取方法 为更好地开发利用土壤未培养微生物资源提供 了有力工具 : ，eDNA ，DNA ，PCR ， DNA 关键词 土壤微生物 抽提 的产量及质量 扩增 大片段 中图分类号:Q93-3 文献标识码 :A 文章编号 :000 1-6209 (20 12)09-1143-08