动物细胞融合与单克隆抗体医学PPT课件.ppt

2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 * 植物细胞A 植物细胞B 去掉细胞壁 去掉细胞壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂 分化发育 愈伤组织 杂种植株 温故知新: 植物体细胞杂交过程 * 材料1: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 人-鼠(想像图) * 一、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 * 3.融合过程： 诱导融合的方法？ * 诱导方法： 物理方法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇（PEG) * 为什么灭活的 病毒能作诱导剂？ 3.融合过程： * 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 P52生物技术资料卡 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌 失去感染能力， 但并不破坏这些病原体的抗原结构。 * 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 使用的酶 诱导方法 主要用途 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 * 4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 5.应用： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 * 动物细胞融合 物理法： 化学法： 生物法： 诱导融合的方法 原理： 细胞膜的流动性 过程： 离心、震动、电激 聚乙二醇（PEG) 灭活的病毒 动、植物细胞融合的主要区别 用途： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 * 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？ * * 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？ * 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 * 抗原 动物体内 抗体 刺激 浆细胞 不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异性差，灵敏度低 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一的效应B细胞 （但不能在体外大量增殖产生大量的抗体） 抗原 动物体内 抗体 刺激 浆细胞 * 单克隆抗体的制备 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体 利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 设计方案： * 1、过程 注射抗原 已免疫的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 * 骨髓瘤细胞 免疫小鼠 单克隆抗体 筛选 克隆、筛选 体内培养 体外培养 B淋巴细胞 （选择培养基） （抗体检测） 细胞融合 杂交细胞 * 1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？ 3、杂交瘤细胞有何特点？ 4、本过程利用的哪些技术？ 思考以下问题： * B BB B瘤 瘤瘤 瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。 * 2、单克隆抗体的优点 特异性强、灵敏度高 * 3、单克隆抗体的应用 （1）作为诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） * （2）运载药物 生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗