十三血清尿素的测定二乙酰一肟法.DOC

实验十七 血清尿素的测定 （二乙酰一肟法） 【目的】 掌握血清尿素的测定原理和方法。 2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。 【原理】 尿素（urea）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的标准液在540nm处比色，求得尿素含量。由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。其反应式如下： 【器材】 试管、试管架、微量加样器及吸量管、沸水浴、分光光度计。 【试剂】 1．酸性试剂　 在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后缓慢加入浓硫酸44ml、85%磷酸66ml，冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g，溶解后移入1L容量瓶中，加去离子水至1L。置棕色瓶中，4℃可保存半年。 2．二乙酰一肟溶液　 称二乙酰一肟20g溶于去离子水中并定容至1L。置棕色瓶中，4℃可保存半年。 3．尿素标准贮存液(100mmol/L)　 精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素(MW为 60.06)0.6g，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。 4．尿素标准应用液(5mmol/L)　 取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。 【操作】 取试管3支，按下表操作： 表3-19 血清尿素测定 加入物 (ml) 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.02 尿素标准应用液 － 0.02 － 去离子水 0.02 － － 二乙酰一肟溶液 0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热 12分钟 ，取出置冷水中冷却 5分钟 ，以空白管调零，在 540nm 波长处读取各管吸光度。 【计算】 【正常参考范围】 1.78～7.14mmol/L 【临床意义】 尿素是蛋白质分解代谢的终产物，在肝中合成，由血液运输到肾随尿排泄。 血液尿素浓度增高有生理性和病理性两方面因素。 1.生理因素 高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3～0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。 2.病理因素 （1）肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。见于剧烈呕吐、肠梗阻、幽门梗阻和长期腹泻等。 （2）肾性：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等使肾小球滤过降低，而使血液尿素含量增高。 （3）肾后性：尿路阻塞可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。 血尿素浓度降低常见于肝功能衰竭患者。 【结果及分析】 【思考题】 1. 什么是NPN，血清中NPN包括哪些物质？ 2. 目前临床上常用于检查肾功能的生物指标有哪些？