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/e1010161 DOI:10.21769/BioProtoc.1010161 水稻种子总淀粉含量的测定 Determination of the Total Starch Content of Rice Seeds 李一博*，彭波 作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：liyibo@ 引用格式：李一博, 彭波. (2018). 水稻种子总淀粉含量的测定. Bio-101 e1010161. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010161. How to cite: Li, Y. B. and Peng, B. (2018). Determination of the total starch content of rice seeds. Bio- 101 e1010161. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010161. (in Chinese) 实验原理：二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸(Dinitrosalicylic acid, DNS) 与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色， 且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含 量的，进而计算出淀粉的含量。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关， 而对还原糖的种类没有选择性，故 DNS 方法适合用在多糖 (如纤维素、半纤维素和淀 粉等) 水解产生的多种还原糖体系中。 实验目的：检测水稻种子或者别的组织中还原糖含量，进而测定其中总淀粉的含量。 关键词：水稻，种子，淀粉含量，测定 材料与试剂 1. 牙签 2. 10 ml 离心管 3. 各种型号的吸头 4. 200 目筛子 5. 水稻种子 6. 葡萄糖苷酶 (Amyloglucosidase, Sigma, catalog number: A7095, USA) 7. pH 试纸 (Sigma, catalog number: 010B164536, USA) 8. 3,5-二硝基水杨酸 (DNS) (Sigma, catalog number: G0550, USA) Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010161 DOI:10.21769/BioProtoc.1010161 9. 浓盐酸 (国药试剂，分析纯) 10. NaAc (国药试剂，分析纯) 11. KOH (国药试剂，分析纯) 12. NaOH (国药试剂，分析纯) 13. D 型无水葡萄糖 (国药试剂，分析纯) 14. Na SO (国药试剂，分析纯) 2 3 15. 重蒸酚 (国药试剂，分析纯) 16. 酒石酸钾钠 (国药试剂，分析纯) 17. 0.4 mol·L-1 醋酸钠缓冲液 (pH = 4.75) 18. DNS 试剂 (见溶液配方) 仪器设备 1. 移液器 2. 棕色试剂瓶 3. 离心机 (Eppendorf, model: centrifuge 5417R, USA) 4. 恒温摇床 (HDL，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司) 5. 旋风式粉碎机 (Udy corporation, Colorado, USA) 6. 精米机 (JMJ-100 型，铁岭精泰制米机械股份有限公司) 7. 电子天平 (OHAUS, USA) 8. 稻谷出糙机 (JLGJ4.5，台州市粮仪厂) 9. 涡旋振荡器 (敖然科技有限公司) 10. 水浴锅 (武汉金宝华科技有限公司) 11. 酶标仪 (TECAN Infinite M200) 12. 酶标板 (Nunclon 96 Flat Transparent) 实验步骤 1. 水稻种子成熟收获后晒干或者烘干，然后将种子进行脱粒处理。 2. 种子在室温保存3 个月后利用稻谷垄谷机上脱壳得到糙米。 3. 将糙米在精米机上粉碎成精米。 Copyright © 2018 The Authors; exclusi