蛋白质分子生物项学改造和表达.ppt

蛋白质的化学修饰：通过活性基团的引入或去除使蛋白质化学(一级)结构的发生改变的过程。 非必需部分的修饰：不影响蛋白质的生物活性。 必需部分的修饰：影响蛋白质的生物活性 。 影响蛋白质化学修饰反应的主要因素有两方面： 蛋白质功能基的反应活性； 修饰剂的反应活性； 化学修饰反应的主要类型： 酰化反应、烷基化反应、氧化还原反应、芳香环取代反应 主要对巯基、氨基和羧基等侧链进行修饰  PCR反应 在一个典型的PCR反应体系中需加入：适宜的缓冲液、微量的模板DNA、四种脱氧三磷酸核苷酸（4×dNTPs）、耐热性多聚酶、Mg2+和两个合成的DNA引物。模板DNA94℃变性1 min，引物与模板40～60℃退火1 min，72℃延伸2 min 扩增条件：94℃60 s,37℃60 s,72℃120 s,共25～30个循环。 Mg2+浓度调到最佳，其浓度变化范围为1～10 mmol/L。Mg2+过量易生成非特异性扩增产物，Mg2+不足易使产量降低。 GFP的不同颜色 Green-GFP blue-BFP：蓝色荧光蛋白 Cyan-CFP ：深蓝色荧光蛋白 Red-RFP：红色荧光蛋白 Yellow-YFP：黄色荧光蛋白 易错PCR（Error prone PCR）是一种相对简单、快速、廉价的随机突变方法。它通过改变PCR反应条件，如降低一种dNTP的量（降至5%-