蛋白质上含量测定-考马斯亮蓝法2.pptVIP

蛋白质含量测定 ——考马斯亮蓝法;实验目的;双缩脲（NH3CONHCONH3）:凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比 . Folin—酚试剂法（Lowry法） Folin—酚试剂中的磷钼酸盐,磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。．Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍. 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法:染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比 .灵敏度高比Lowry法约高四倍 ;实验原理;Coomassie Dye-Based 蛋白质定量; Bradford 法的突出特点: (1)灵敏度高。其最低检测蛋白质含量可达1mg，这是因为蛋白质与染料相结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的吸光系数。 (2)测定快速，简洁，完成一个样品的测定，只要5分钟左右 。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定（且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好） (3).干扰物质少。;缺点: (1) 各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此不同蛋白质时有较大的偏差 ；