雌性东方蜜蜂基因表达差减文库的构建及初步分析-云南农业大学学报.PDF

云南农业大学学报　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１５，３０（５）：７１０－７２１ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＩＳＳＮ１００４－３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸ Ｅｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕｅｄｕｃｎ ：１０１６２１１／ｊｉｓｓｎ１００４－３９０Ｘ（ｎ）２０１５０５０１０ ＤＯＩ 雌性东方蜜蜂基因表达 差减文库的构建及初步分析 １，２ ３ １ １ 樊　莹 ，邹丰才 ，董　霞 ，匡海鸥 （１云南农业大学 东方蜜蜂研究所，云南 昆明６５０２０１； ２贵州省畜禽遗传资源管理站，贵州 贵阳，５５３０００； ３云南农业大学 动物科学技术学院，云南 昆明６５０２０１） 摘要：蜜蜂的蜂王和工蜂是两种不同的表型，这是基于基因的差异表达，而不是遗传物质的多态性。本研究 以雌性东方蜜蜂为材料，利用抑制消减杂交技术构建东方蜜蜂蜂王和工蜂的基因差异表达的文库。挑选插入 片段大于２００ｂｐ的３３０个阳性克隆进行测序，蜂王消减文库 １７６个，工蜂消减文库 １５４个。测序后蜂王消减 文库获得１６１条ＥＳＴｓ序列，工蜂消减文库获得 １４２条ＥＳＴｓ序列。获得的序列采用ＤＮＡｓｔａｒｓｅｑＭａｎ软件进行 载体、接头和低质量序列去除后进行ＥＳＴｓ分析，蜂王消减文库获得１１０个ｃｏｎｔｉｎｇｓ，工蜂消减文库获得８１个 ｃｏｎｔｉｎｇｓ，蜂王和工蜂文库均有部分重叠的ＥＳＴｓ序列。在ＮＣＢＩ上进行在线ＢＬＡＳＴｘ和ｔＢＬＡＳＴｎ同源比较，发 现在蜂王的ＥＳＴｓ中有６２个已知ＥＳＴｓ，３个未知ＥＳＴｓ，工蜂的ＥＳＴｓ中有４９个已知ＥＳＴｓ，８个未知ＥＳＴｓ。通 过基因本体论进行功能分析，大部分差异表达的基因为酶类和结合蛋白，主要参与基因的转录、翻译和新陈 代谢过程。雌性东方蜜蜂差减文库的构建，为进一步研究蜜蜂级型分化的机制奠定了基础。 关键词：东方蜜蜂；抑制消减杂交；差异表达基因；消减文库；ＥＳＴｓ 中图分类号：Ｓ８９１２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１５）０５－０７１０－１２ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄＰｒｉｍａｒｙＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎＳｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎＬｉｂｒａｒｉｅｓｆｏｒＦｅｍａｌｅＡｐｉｓｃｅｒａｎａ １，２ ３ １ １ ＦＡＮＹｉｎｇ ，ＺＯＵＦｅｎｇｃａｉ，ＤＯＮＧＸｉａ，ＫＵＡＮＧＨａｉｏｕ （１ＥａｓｔｅｒｎＢｅｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ； ２ＴｈｅＬｉｖｅｓｔｏｃｋｏｒＰｏｕｌｔｒｙＧｅｎｅｔｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｏｆＭａｎａｇｅｍｅｎｔＳｔａｔｉｏｎ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５３０００，Ｃｈｉｎａ； ３ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｔｗｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｈｏｎｅｙｂｅｅｓ，ｑｕｅｅｎａｎｄｗｏｒｋｅｒｓ，ａｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｒａｔｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｏｆｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｔｅｒｉａｌ．Ｔｈｅａｉｍｗａｓｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｉｂｒａｒｉｅｓｂｙｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＳＳＨ）ｆ