实验八 果蝇唾腺染色体的观察.pptVIP

实验七 果蝇唾腺染色体的观察 一、实验目的 1．练习取出果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。 2．了解体细胞染色体联会现象，观察果蝇唾腺染色体的形态特征，并根据唾腺染色体上横纹的形态和排列，识别不同的染色体。 3．识别染色体结构变异的细胞学表现。 二、实验原理 本世纪初，D.Kostoff用压片法首先在果蝇幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体---唾液腺染色体。由于它具有许多重要特点而成为细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学和分子遗传学研究中不可多得的好材料。 果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的唾液腺染色体。 唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体。 唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。 果蝇种间或种内不同品系与近缘种之间的遗传差异常表现为唾液腺染色体不联会，形成泡（puff）、缢痕（constrictions）、间带区（interband）的伸缩性以及顶体（telomere）的形态等多方面的变异，特别重要的是可观察是否产生了倒位、染色体的断裂、融合或重排，据此研究其基因序列的差异。因此，无论从细胞遗传学的角度研究基因与突变性状之间的关系，还是从进化遗传学方面研究染色体的系统发育，探讨近缘种间的遗传差异和生殖隔离机制等，唾液腺染色体的分析研究都是十分重要的。果蝇唾液腺染色体已广泛用于种内系统发育和种间亲缘关系的研究中。 普通果蝇（2n=2x=8）唾腺染色体的特点表现在：各染色体着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的染色中心，第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈Ｖ形（中着丝粒），各有两臂，Ｘ染色体呈棒状，第Ⅳ对染色体呈粒状，观察时可见五条臂由染色中心向外蜿蜒伸展。 三、实验材料 果蝇三龄幼虫活体。 四、实验器具、药品试剂 显微镜，生化培养箱；果蝇培养瓶，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，吸水纸等。 0.7％氯化钠（NaCl），1mol/L HCl；改良苯酚品红染色液；果蝇培养基等。 五、实验步骤： 三龄幼虫-----解剖------解离（1M HCl）2-3min------水洗3-4次-----染色-----压片观察照相 三龄幼虫 黑腹果蝇卵长0.5毫米，被绒毛膜，有一对触丝（filament）。 三龄幼虫解剖图解 1．培养果蝇三龄幼虫 将果蝇放在营养丰富的培养基中，15℃～18℃下饲养，幼虫要生长肥大，才能获得较大的唾腺。 培养要求： ①饲料松软，含水量较高，营养丰富，发酵良好（建议配方：玉米粉10g，红糖13g，琼脂1g，酵母粉2g，丙酸3～4滴，加蒸馏水100～120ml）。 ②追加酵母液。在一龄幼虫出现后，将成虫移入另一培养瓶中，在饲料表面滴加低浓度的酵母液（2％～4.5％），每天滴加1～2滴；2龄～3龄幼虫时期适当增加酵母液的浓度（约10％左右）；滴加的量以覆盖在饲料表面薄薄的一层为宜。 ③控制幼虫的密度。一般情况下，半磅牛奶瓶中10对成虫交配后在12h左右必须将成虫转移，一般要求每cm2培养基表面20～40只幼虫左右。 ④低温培养：稍低的温度有利于幼虫的充分生长发育，一般15℃～18℃较为合适。 2．取唾腺 挑选生长肥大的三龄幼虫放入表面皿中，用0.7％的生理盐水尽量洗去幼虫体表所沾附的培养基，然后将幼虫置载玻片上，滴1-2滴0.7％生理盐水，找到具有口器的头部(有一小黑点)，用一手解剖针刺入(或压住)头部，将虫固定，另一手用摄子夹紧幼虫下半部(尾端1/3处)，轻轻向两端拉开，唾腺随头部拉出。唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织(不透明)。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。 唾液腺 在低倍显微镜下，调节好光亮度观察，可见一对半透明、隐约可见细胞界限的囊状物——唾腺。移去虫体其余部份，用解剖针剔除附在唾腺一侧深色泡沫状的脂肪体。若载片上杂质较多，可用生理盐水适当冲洗，用吸水纸吸去多余的生理盐水。 注意：在整个剥离过程中，不能让载片上的生理盐水干涸，否则唾腺收缩而不易剥离；冲洗残渣和吸去多余水液时，要避免唾腺被吸水纸吸走。 3．解离 将剥好的唾腺移到载片中央，加一滴1 mol/L HCl于腺体上，解离２～３min使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体展开。 4．染色 用吸水纸吸去HCl，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后，小心吸干。加1～2滴改良苯酚品红或其它染液，染色10～15