应用MADB-106乳腺癌细胞构建大鼠转移性骨癌痛模型.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文山西医科大学硕士学位论文 前 前 言言 前前 言言 现代癌症治疗学迅速发展，癌症患者的生存率提高了，寿命也得到了延长，但与此同 时也给学者们提出了如何更有效地管理癌症患者这一新的问题[1-3] 。 约有三分之二的晚期癌症患者会发生骨转移[4-6] ，骨转移被认为是癌症引起晚期癌痛 最常见的原因。最容易转移到骨的是肺癌，乳腺癌，前列腺癌和卵巢癌。最常见的转移部 位是胸椎，腰椎和骨盆等[7-9] 。随着肿瘤细胞的生长，骨质的正常结构发生破坏，轻度受压 或体位改变时会出现剧烈的疼痛。 癌痛长期困扰着肿瘤病人，严重影响着病人的生活质量，因此研究癌痛的机制，缓解 癌痛成为临床上的迫切需要，建立模拟人类骨癌痛的动物模型成为了当前亟待解决的问 题。 近年来，国内外通过血流播散，细胞系原位接种，局部注射制作转移性骨癌痛动物模 型。左心室注射法是通过血流播散的一种癌症骨转移制作方法, 但其常引起多器官的多发 性转移,并导致某些骨转移动物模型尚未制备成功就因癌症转移至重要器官而死亡。将细 胞系接种至原位，形成自发性的转移性骨癌痛动物模型，该方法形成的骨转移模型是较好 得模拟了临床上常见的乳腺癌骨转移病例,其中自发性小鼠乳腺癌细胞系所形成的自发性 骨转移模型是与临床状况极为相同的骨转移模型,但其模型制备所需时间长，模型生长一 致性差，对照不易形成。局部注射制作法比较简单,也不易形成多脏器转移。 目前，国内外学者广泛应用乳腺癌细胞，前列腺癌细胞等癌细胞局部注射至骨髓腔成 功构建了股骨、跟骨和胫骨癌痛动物模型。 骨癌痛模型中,应用乳腺癌细胞建立的大鼠胫骨癌痛模型可视为临床常见的乳腺癌骨 转移模型,手术操作较简便,评价方法成熟,具有研究意义。 本实验小组应用MADB-106大鼠乳腺癌细胞构建转移性骨癌痛模型，以大鼠自发性缩足 反射次数来评估大鼠自发性痛情况，以自由活动时下肢跛行程度评分来观察行走诱发痛， 以大鼠热痛觉阈值观察大鼠热痛觉过敏情况，以X线、骨组织病理学检测观察癌细胞对骨 结构的破坏程度。癌痛动物模型的成功制备将极大地促进癌痛机制的深入研究、癌痛新疗 法的探索、镇痛药物的筛选。 1 山西医科大学硕士学位论文山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文山西医科大学硕士学位论文 材 材 料料 与与 方方 法法 材材 料料 与与 方方 法法 一．一．实验材料实验材料 一一．．实验材料实验材料 1．实验细胞与动物． ．． ﹙﹙1 ﹚ ﹚ MADB-106 细胞，购自中国典型培养物保藏中心 ﹙﹙ ﹚﹚ ﹙2 ﹚ SD 大鼠，购自山西省中医药研究院动物中心 2 ．药品与试剂． ： ．． （1）RPMI1640 培养基：美国 Gibco BRL 公司 （2 ）胎牛血清：杭州四季青公司 （3 ）胰蛋白酶：北京夏斯生物技术有限公司 （4 ）PBS 缓冲液：武汉博士德公司 （5 ）二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide, DMSO ）：淮安和元化工有限公司 ﹙7 ﹚ 无水乙醇：华北制药有限公司 ﹙8 ﹚ 生理盐水：石家庄第四制药公司 ﹙9 ﹚ 4%多聚甲醛固定液 ﹙10 ﹚切片保护液 ﹙11 ﹚10%水合氯醛 3 ．仪器与设备： ﹙1 ﹚ 电热恒温干燥箱：上海吴凇五金厂 ﹙2 ﹚ 无菌工作台：北京市新技术应用