分子生物学-RNA的制备.pptVIP

④ 将裂解液加到离心柱（淡紫色）上下接一个2ml收集管，最大转速离心 2min。裂解液通过柱子时被均质化，小心吸取上清液，转移到另一新离心管； 加入0.5倍体积（225 μl）96～100% 乙醇，混合均匀。加入乙醇后，可能会出现沉淀，无影响； 细胞碎片被阻留在柱子上，包括RNA在内的分子物质通过离心柱 所谓 均质化 将混合液全部（包括沉淀675 μl）转移到吸附离心柱（粉红色）内，下接2 ml的收集管，10000 rpm离心15秒。弃去管内液体； ⑦加入700μl RW1缓冲液，10000rpm转速下离心25秒，弃去收集管； ⑧将离心柱转移到一个新的2ml收集管上，加入500μl RPE缓冲液，10000 rpm离心15秒，弃去管内液体重复使用收集管； 加入500μl RPE到离心柱内，最大转速离心2min，干燥离心柱，弃去收集管； ⑩把离心柱接在一个新的1.5 ml Eppen管上，加入30～50μl 无RNase水（0.1%DEPC处理），10000 rpm离心 1min，洗出RNA。若RNA产量在20μg以上，用30～50 μl无RNase水再洗脱1次。RNA样品保存于-20℃备用。 RNA的检测： RNA的检测主要用琼脂糖凝胶电泳，分为非变性电泳和变性电泳。一般变性电泳用的最多是甲醛变性电泳（如Northern blot 实验过程中）。 由于RNA分子是单链核酸