分子生物学5.2.2细菌转化筛选.pptVIP

5.2.2 细菌转化 筛选 转化 transformation 感受态 抗生素筛选 蓝白斑筛选 Blue white screen 重组DNA技术流程简图 ligase vector restriction endonuclease foreign DNA bacterial cell host 分 切 连 转 筛 细菌转化 转化：细菌吸收外源DNA而导致性状发生遗传改变。 感受态：细菌处于容易吸收外源DNA的状态 细菌产生感受态的类型 在生长周期的任何时刻自动产生感受态；（e.g. 枯草杆菌） 在生长周期的特定时刻产生感受态；（e.g .大肠杆菌） 制备感受态细胞方法 原生质体法 电击法 特殊试剂诱导法：CaCl2诱导法 CaCl2诱导转化 0℃,CaCl2低渗溶液中,细胞膨胀成球, 外源DNA形成抗DNA酶的羟基钙磷酸盐混合物黏附于细胞表面, 短时间42℃热击处理,促进细胞吸收DNA复合物。 将细菌放在非选择性培养基上保温一段时间，使抗氨苄青霉素的表型表达后，再转到含氨苄青霉素的选择性培养基上，长出来的菌即为转入了外源基因的菌株。 重组DNA转化的受体细胞 常见的宿主细胞： DH5?: 缺陷型的菌株，可与pUC编码的?-半乳糖苷酶氨 　　　基端实现?互补。 HB101: 用于大规模制备质粒的抑制型菌株，转化效率高 JM101: