TRAIL、c―FLIP在大肠癌和转移淋巴结中表达和意义.docxVIP

TRAIL.c-FLIP在大肠癌和转移淋巴结中表达和意义 ［摘要］目的检测TRAIL. c-FLIP在结直肠癌中的 表达情况，探讨二者在大肠肿瘤的浸润转移及凋亡调控机制 的可能相互关系和作用。方法选取新鲜结直肠癌、配对的 癌旁正常组织各85例及转移淋巴结51例，运用MaxVision 免疫组化和Western blot蛋白定量检测TRAIL. c-FLIP在 各组间的表达，所得结果进行统计学分析。结果(l)TRAIL 在结直肠癌组织中的定位及表达位于细胞膜及细胞浆，而 c-FLIP主要位于细胞浆O(2)TRAIL在癌组、转移淋巴结(LNM) 组与癌旁正常组的均广泛表达，三者比较差异无统计学意义 (P0. 05)；癌组中，未/低分化阳性表达与中高分化比较、 无LNM组与LNM组比较差异无统计学意义(P0. 05)； (3) c-FLIP在癌组阳性表达明显高于正常组(且无一例强染色); 转移淋巴结组阳性表达亦明显高于正常组，其强阳性表达 88. 2% (45/51),与癌组比较差异无统计学意义(P0. 05)。 其癌组中未发生淋巴转移阳性表达88. 2% (30/34)、淋巴转 移100% (51/51)、未/低分化和中高分化分别为96. 8% (30/31)、94. 4% (51/54), 81例阳性表达中强阳性74% (60/81)；未/低分化腺癌与中高分化组表达比较差异无统 计学意义(P0. 05)。(4) Western blot蛋白定量检测发现, 对于TRAIL,呈现出c-FLIP蛋白表达越高，其表达也反应性 增高的趋势，TRAIL蛋白的表达与c-FLIP的表达呈相互拮抗 性正相关。结论(1) c-FLIP在结直肠癌组织和转移淋巴 结中存在过高表达，在正常组织低表达或不表达，而TRAIL 在癌组织和转移淋巴结组织也存在相互拮抗性增高趋势。 (2)高表达的c-FLIP可能与TRAIL死亡受体凋亡途径相互 作用，对大肠癌的发生进展起到一定的作用。 ［关键词］TRAIL； c-FLIP；凋亡；结直肠癌；淋巴结转 移 ［中图分类号］R735. 3+4 ［文献标识码］A ［文章编号］ 2095-0616 (2013) 12-10-04 结直肠癌是全世界临床上最常见恶性肿瘤之一，近年来 发病率呈明显的上升趋势，其术后浸润转移及局部复发是结 直肠癌患者死亡的主要原因，预后极差，5年生存率低［1-2］ o 结直肠癌的发生进展需要众多分子机制的参与，结直肠细胞 的不稳定性、异常延长存活时间和最终恶变，与细胞凋亡机 制密切相关。 TRAIL (TNF相关凋亡诱导配体)，是TNF家族成员之一, 可强烈选择性诱导和促进多种肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞 无明显促凋亡作用，是很有前景的抗肿瘤因子之一。c-Flip 全称为细胞型Fas相关的死亡区域蛋白样白介素-1转换酶抑 制蛋白，可强效抑制TRAIL-Rs和TNF-R1等死亡受体诱导的 细胞凋亡，从而阻断细胞发生凋亡[3-4] o目前有关于TRAIL 和c-FLIP在结直肠癌中相互作用的研究鲜有报道，本研究 采用免疫组化方法和Western blot对两者在结直肠癌及转 移淋巴结中的表达情况进行研究，以初步探讨两者在结直肠 癌中相互关系及意义。 1材料与方法 1组织标本 收集汕大附一医院2010?2011年手术切除大肠腺癌标 本85例，配对选取距癌5 cm外正常组织相同例数，所得标 本均经病理学确诊。其中男49例，女36例，年龄21?92 岁，所有患者术前未行任何治疗。85例大肠腺癌中，51例 发生淋巴结转移，未/低分化腺癌31例，中高分化腺癌54 例。所有标本分为两部分，一份立即置于-801冰箱保存， 标本收集后进行Western blot检测；另一份制成常规病理 标本。 1. 2方法 免疫组化：采用MaxVision- (TM)即用型快捷免疫组化 一步法，兔抗人TRAIL多克隆IgG抗体、兔抗人c-FLIP多 克隆IgG抗体和免疫组织化学染色试剂盒均购于上海博奥深 生物技术有限公司；一抗TRAIL以1^100、c-FLIP以1^120 稀释，均以已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴 性对照，DAB (聚合物法)显色。 Western blot： Western blot 相关试剂、ECL 显影液购 于上海博奥深公司，内参0-actin及相应二抗购自美国 Santa 公司。一抗 TRAIL 以 1 ? 120、c-FLIP 以 1?150 稀释, ECL显色拍片。 1.3结果判断标准 免疫组化染色切片采用电子光学显微镜进行观察，随机 选择5个视野，每个视野计数100个细胞，由两名专业病理 医师读片，TRAIL主要表达定位于细胞质和细胞膜，c-Flip 主要定位于细胞质。判断标准均使用FD