接受拉米夫定治疗的慢性乙肝患者HBV反转录酶区新变异rtM204Q的表.PDFVIP

　 军 杂 20 12年6月1 日　第37卷　第6期 446 解放 医学 志　 接受拉米夫定治疗的慢性乙肝患者HBV 反转录酶区新变异 rtM204 Q 的表型特点分析 王嫣，刘妍，许智慧，思兰兰，陈丽，戴久增，姚增涛，徐东平 [摘要]　目的　分析乙肝病毒(HBV )反转录酶(RT) 区YMDD功能域新变异rtM204 Q 的表型特点。方法　从1例接受 拉米夫定(LA M)治疗的慢性乙肝患者血清中提取HBV DNA ，扩增HBV 全长RT 区基因，PCR产物直接克隆到p GEM-Teasy Xho Sph 载体中，随机挑选40个克隆进行DNA 序列测定并分析耐药相关变异。将 I/ I双酶切后的RT 片段与载体连接成含 HBV 1. 1倍基因组长度的重组载体。采用Fu GENE® HD试剂盒，将构建的含野生株和变异株的重组载体转染至人肝癌细 胞系Hep G2细胞。转染4h后加入不同浓度的核苷(酸)类药物[LA M终浓度为0 、0.0 1、0. 1、1、10 、100 μ