血红铆钉菇菌种及菌群扩繁技术规程-黑龙江质量技术监督局.DOCVIP

ICS?65.020.40 B 64 DB23 黑龙江省地方标准 DB 23/T XXXX—XXXX 血红铆钉菇菌种及菌群扩繁技术规程 XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施 黑龙江省质量技术监督局 发布 DB23/T XXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT I 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：哈尔滨市林业科学研究院、哈尔滨市胜利实验林场。 本标准主要起草人：董希文、吴晓林、庞凤艳、程远、赵金艳、王婷玉、叶纯子。 血红铆钉菇菌种及菌群扩繁技术规程 范围 本标准规定了血红铆钉菇(Chroogomphidius viscidus) 菌种及菌群扩繁过程中的术语和定义、菌种扩繁、菌群扩繁等技术要求。 本标准适用于血红铆钉菇的菌种及菌群扩繁。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 528-2010 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742-2009 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 2375 食用菌生产技术规范 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 血红铆钉菇 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=224074ss_c=ssc.citiao.link \t _blank 担子菌亚门、 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=8629265ss_c=ssc.citiao.link \t _blank 层菌纲、伞菌目、铆钉菇科、铆钉菇属真菌。 3.2 固体母种 又称一级菌种，为血红铆钉菇的纯菌丝固体培养物及继代固体培养物。 3.3 液体菌种 由固体菌种接种于液体培养基扩繁而来的纯菌丝培养物，培养容器为玻璃瓶或发酵罐。 3.4 菌群 这里指在林地内由血红铆钉菇菌丝形成的肉眼可见的集团。 菌种扩繁 环境及设备要求 4.1.1 设置和布局 原料库、接种室、培养室、灭菌室、贮存室的设置和布局、环境卫生要求，按NY/T 528中4.2和4.3规定的执行。 4.1.2 设备设施 接种室、培养室、灭菌室、贮存室的设备设施，应符合NY/T 528中4.4的规定。 4.2 菌种培养 4.2.1 制备固体母种 松针煮汁制备 摘取当年生、无病斑的樟子松、赤松或油松松针，去除叶鞘，剪成长1 cm长段，称取200 g，放入≥2000 mL烧杯中，加水800 mL，煮沸1 h，中间不断补充蒸发掉的水分至800 mL，用双层纱布过滤，再弃掉滤液中的沉淀，即成松针煮汁。 培养基配方 松针水煮液800 mL、葡萄糖10 g、蛋白胨5 g、KH2PO4 1g、MgSO4.7H2O 0.5 g、琼脂20 g、水200 mL。 装管 将上述剂量的葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4.7H2O 放入200 mL水中，加热至所有物质融化后，将其加入到松针水煮液中，混匀，放入20 g琼脂，加热融化。然后分装至试管中。15 mm×150 mm的试管装3 mL～4 mL，18 mm×180 mm的试管装6 mL～10 mL，20 mm×200 mm的试管装12 mL～15 mL。分装完毕后，用普通新鲜的干燥的棉花塞或硅胶塞封试管口，棉塞或硅胶塞的2/3应在试管内。塞的松紧应以手提试管塞，管不下落，但稍用力即可拔出为宜。 灭菌 将试管10支扎成一捆，用防潮纸或牛皮纸包住试管口棉塞，管口朝上装入灭菌筐中，将灭菌筐放入灭菌锅内灭菌。如用高压灭菌，在（1.2～1.5）kg/cm2压力下保持20 min；如用常压灭菌，100 ℃条件下保持40 min。 制作斜面培养基 灭菌后，经自然冷却，待高压灭菌锅气压降至0或常压灭菌锅内的温度≤27℃、棉塞水分充分蒸发后取出试管。在实验台上放厚度为1 cm左右的木条类软质承垫物。将试管管口端枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 接种方法 .1 消毒灭菌 接种室、接种箱、超净工作台、接种器具的消毒灭菌方法，按NY/T 528-2010中4.7.7的规定执行。 .2 接种 选择新鲜、无病虫害的血红铆钉菇实体作分离材料。在无菌环境下，用接种针，在菌盖与菌柄的交接处挑取黄豆大小的组织块迅速移接到斜面中央。 ? 母种培养 接种后，将试管培养基放置于温度25 ℃～28 ℃、相对湿度55 %～65 %的洁净环境下培养。菌种培养过程中应及时去杂，将试管内菌丝生长粗壮的留作母种。 4.2.2 制备固体原种及栽培种 培养基配