课件：动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

教学参考 1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？ 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌—鸡 原生质体—血红细胞 1975年 人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年 人—小鼠 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年 要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。 2.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？ 就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 3.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 教学反馈 1.动物细胞融合技术最重要的用途是 （ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 B 2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ 　 ）A.B淋巴细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞 D 3.（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是 （　 ） A.效应B细胞 B．T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞 　　 D．杂交瘤细胞 A B C D B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案 制备单克隆抗体 不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。 (1).该实验方案的目的是：________________ (2).该方案能达到预期效果吗？为什么？ (3).A是从小鼠的脾脏中取得__________ 该细胞能够产生______ 。 (4).图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。 (5).C过程指细胞培养，该过程包括________培养和__________培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。 B淋巴细胞 抗体 细胞融合 灭活的病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50 课后习题 1. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤　　 C.①②③④ 　 D.②③ C 2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ( ) A.细胞膜的流动性 B．细胞膜