细胞生物学-李赟-第11章 细胞凋亡.pptVIP

* 细胞坏死 细胞凋亡在性质上与细胞坏死的对比图解 凋亡 小体 细胞凋亡 细胞坏死时，质膜破裂，细胞质溢出； 细胞凋亡，细胞质凝缩，但质膜仍保持完整 程序性细胞死亡与细胞坏死的区别 比较项目 程序性细胞死亡 细胞坏死 诱导因素 体内生理性信号 强烈的刺激因素 质膜 不破裂 发生破裂 细胞质 由质膜包围形成凋亡小体 溢出，细胞破裂成碎片 细胞器 无明显变化 肿胀、破坏 细胞核 固缩、断裂 核被膜破裂 染色质 沿核膜凝缩成半月形团块 松解成网状 DNA 有规律降解，呈现梯形电泳带 随机降解 基因活动 由基因调控 无基因调控 代谢反应 有蛋白酶参与的级联反应 无有秩序的代谢反应 对个体影响 个体正常存活需要 有破坏作用，引起炎症反应 （二）细胞凋亡的生化特征 染色质DNA的降解是程序性细胞死亡的一个显著特征。细胞染色质DNA的特征性降解可作为细胞凋亡的一个重要的实验判断依据。 内源性核酸内切酶基因的活化，染色质DNA降解，染色质DNA的断片大小都为180－200bp的整数倍，因而在电泳时，呈现特征性的DNA梯状条带 (DNA ladders)。 1．DNA片断化 * 细胞色素c诱导的凋亡细胞DNA电泳图 1．诱导0 h 2．诱导1 h 3．诱导2 h 4．诱导3 h 5．诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker * 2.蛋白质降解 切冬酶(caspases)是一组存在于细胞溶胶中的结构上相关的，能特异地断开天冬氨酸残基后的肽键，活性中心含半胱氨酸的蛋白酶，能分解细胞蛋白，起凋亡执行器的作用。 * 三 细胞凋亡的检测 ◆形态学观测：染色法（台盼兰、DAPI）、透射和扫描电镜观察 ◆DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带 ◆TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端 标记法，对DNA分子断裂缺口中的3’-OH 进行原位标记。 ◆彗星电泳法（comet assay） ◆流式细胞分析 ◆检测细胞膜成分变化 细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸翻转至细胞膜外侧 四 诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子，包括射线（紫外线，? 射线等）， 较温和的温度刺激（如热激，冷激）等 ◆化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA 和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿 瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等 Caspase的研究首先是在秀丽隐干线虫细胞的凋亡开始的，从胚胎发育至成体，线虫共产生了1090个体细胞，其中131个体细胞凋亡。研究发现ced3,ced4基因促进细胞凋亡，ced9基因阻止ced3/ced4的激活，抑制细胞凋亡。 2002年美国麻省理工学院的Robert horvitz,英国的Sydney Brenner和John E. Sulston因在线虫细胞凋亡方面的创新性研究共同获得诺贝尔医学和生理学奖。 Sydney Brenner H. Robert Horvitz John E. Sulston 第三节 细胞的凋亡机制 细胞凋亡大致分为四个生化反应阶段。 ①凋亡信号转导阶段。 ②凋亡基因激活阶段。 ③细胞凋亡的执行阶段。 ④凋亡细胞的消除阶段。 * （一）细胞凋亡的途径与过程 细胞凋亡发生过程的形态学阶段 1.诱导凋亡期：诱导因素，信号传导 2.执行期：启动凋亡，凋亡小体 3.消亡期：被吞噬 * 第十三章 细胞衰老和细胞凋亡 Chapter13 cell senescence and Apoptosis 机体结构 细胞增殖 细胞分化 细胞凋亡 细胞信号转导 染色体 （DNA与蛋白质的相互作用） 衰老 一、细胞衰老的概念 机体的形态、结构和生理功能逐渐衰退的总现象称为衰老(aging，senescence)。 细胞衰老(cell senescence)是指细胞在正常环境条件下发生的细胞生理功能和增殖能力减弱以及形态发生改变，并趋向死亡的现象。 * 机体衰老并不等于所有细胞的衰老，但机体的衰老是以细胞总体的衰老为基础的。 社会老龄化与老年医学(gerontology)。 一般说来能保持持续分裂能力的细胞不容易衰老；而分化程度高、又不分裂的细胞寿命却是有限的，容易发生衰老和死亡。 （一） 体内细胞存活的时间与细胞的种类有关 接近或等于动物自身寿命的细胞 缓慢更新（长于30天，短于动物平均寿命）的细胞 快速更新（少于30天）的细胞 神经元 脂肪细胞 肌细胞 骨细胞 唾液腺细胞 肝细胞 胰岛细胞 肾皮质细胞 皮肤表皮细胞 角膜上皮细胞 口腔细胞 * 动物体细胞在体外可传代的次数与物种寿命有关 （二）体外培养细胞分裂次数与衰老 * 人胚的成纤维细胞：可持续分裂60