茶树种子在低温贮藏过程中差异基因表达的研究.pdfVIP

和非临界含水量两种假说，目前比较认同的观点是脱水引起膜完整性被破坏，进而引 起酚被释放氧化，与形成结合物导致酶失活。顽拗性种子多是一些水生植物和具有大 粒种子的多年生木本植物，包括一些热带作物，热带果树，热带林木和温带植物。由 于种类多，它们的大小、成熟度、种子结构、含水量等均有差异。常见的顽拗性种子 有板栗、龙眼、荔枝、橡胶、可可、椰子等。 温度是影响种子贮藏寿命的重要因素。Grovesl917年用公式表示温度和小麦种 寿命可相应延长l倍；王培蒂等证明低温有利于种子的长期贮藏；Rincker则证实在 低温环境中温度的短时间改变不会对种子造成不良影响。 在低温条件下，‘植物种子的生命活动减弱，通常有利于植物种子寿命的延续，因 此低温贮藏是长期保存种子资源的常用方式。通常贮藏种子的低温环境分两类，一类 是．80℃以下的温度环境，这通常被称为超低温；另一类是在．80℃以上到．18／20℃的 温度环境中，这有时也被称为超低温，但这一温度范围相对高得多。国际植物遗传资 般研究均认为低温贮种只适用于正常型种子。相关正常种子贮藏的研究均证明，随着 温度的降低，种子的贮藏期可大大延长，特别是在低于．80℃超低温环境中，几乎可 以永久保存。 低温环境中顽拗性种子长期保存的研究也比较丰富，但结果很不一致。郑郁善【6】 等针对板栗种子的研究认为超低温保存的板栗种子，其发芽率最大的影响因素仍然是 水分含量，20％含水率的效果最好；其次是冷冻方式，对保存材料进行预降温到0--5℃ 处理是必需的；解冻方式的影响则比较小。根据唐安军等的资料，顽拗性种子低温保 存主要的问题是恢复生长存在障碍，如欧洲栗虽然能产生根或茎，但在培养的时间内 均未能产生幼苗，影响顽拗性种子低温贮藏的可能原因是种子含水量比正常种子高得 多。胡晋等在研究作物种子生活力时所得出的含水量是决定种子能否存活的关键因素 川，刘燕等在研究园林花卉种子超低温保存时认为含水量对于不同种子超低温贮藏效 果不同[81。 种子的超低温保存，含水量高低以及脱水方法是关键因素。含水量过高会造成保 存材料在冷冻和解冻过程中受到冻害甚至死亡，过低又会造成脱水伤害影响其活力。 若能最大限度地减少脱水伤害和降低含水量，保存材料的活力就能得到最大限度的保 持。正常种子超低温保存的最适含水量一般在9％以下，有的含水量下限值达到 2 低含水量下限通常较高，在10％以上(郑郁善等，2001；陈礼光等，2001)t91。 目前对顽拗型种子长期保存的研究集中在低温和长期保存后种子的活力和生理 变化上，虽然这些研究积累了许多有益的资料，但距实际应用还有相当大距离。随着 科学技术的不断发展，从分子水平上研究顽拗型种子不耐低温的本质，揭示生物学中 带有普遍性的衰老与死亡的重大基本规律，具有极其重要的理论意义，对茶树和其它 顽拗型种子植物的种质资源保存也具有重要的实践意义。 1．2cDNA．AFLP技术及其在基因差异表达分析中的应用 1．2．1 eDNA．AFLP技术国内外研究的进展 目前有多种分析基因表达水平及差异表达基因筛选的方法：Northern杂交、消 减杂交(subtraetive hybridization)、差示筛选(differential of (differentdisplay)、微阵列分析(microarray)、基因表达序列分析(serialanalysisgene expression， fragmentlength SAGE)及cDNA-AFLP(cDNAamplified polymorphism)。 其中杂交法、差示筛选和mRNA差别显示只适合于高丰度或表达差异大的基因筛选， 且由于在筛选基因方面的随机性使之无法描述转录组的全貌。SAGE、微阵列和 由于PCR反应中采用较高的退火温度，反应条件严谨，可靠性高，重复性好，且不 需要预先知道序列信息，所需仪器设备简单，相对于SAGE和微阵列而言，可更广泛 了白花丹叶烟草休眠和后熟种子基因表达图谱，在RNA水平上研究了种子在后熟过 调节基因；Wang等(2005)通过对抗病和感病大豆品种的杂交，从中分离得到抗 已二醇作干燥剂