用新型尼龙亲和膜纯化人血浆蛋白甘宏宇-色谱.PDF

用新型尼龙亲和膜纯化人血浆蛋白 甘宏宇，商振华，秦国平，刘学良，王俊德 （中国科学院大连化学物理研究所，辽宁大连116012） 摘要：以微孔尼龙膜为基质，分别采用三氯三嗪和1,4－丁二醇二甘油醚活化法制备了一系列亲和膜。首次使用平 板亲和膜方法经一步操作即从人血浆中纯化得到高纯度的 -球蛋白、纤溶酶原。电泳分析显示，纯化得到的人血 浆 －球蛋白，纯度在83％以上；纯化得到的 -球蛋白和纤溶酶原的纯度均高于市售同类产品；另外，初步探索了人 血浆凝血酶的一步纯化法。该法纯化得到的凝血酶比活为42.0NIH单位/g～2.5NIH单位/mg。 关键词：亲和膜色谱；尼龙膜；人血浆；纯化；-球蛋白；纤溶酶原；凝血酶 中图分类号：658 文献标识码耄：A 文章编号：1000-8713(2001)03-0203-04 1 前言 2 实验部分 人血浆中各种血浆蛋白与酶具有不同的生理功 2.1试剂与仪器 能，均具有医学价值，对它们的分离纯化具有重要意 尼龙6膜 购（自江西庆江化工厂），EupergitC 义。工业化的血浆纯化于20世纪40年代发展起 250以粒径为250蘭m）购（自Rohm），三氯三嗪y（- 来[1]，所用的技术大部分是连续乙醇沉淀法，应用 Cl）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚 (BDE)、牛 -球蛋白 此法生产了白蛋白和免疫球蛋白[2]随着人们对 (BGG)、人纤溶酶原(6U/mg～9U/mg)均（购自 血浆产品的纯度和安全性提出进一步要求，亲和色 Sigma公司），羟乙基纤维素(HEC)购自Fluka公 谱技术开始应用于血浆的纯化[3。 司),6-氨基己酸 A（CROS产品）,－丙氨酸 P（he) 亲和膜色谱，即以微孔膜为分离介质的亲和纯 购（自上海丽珠东风生物技术有限公司），L色氨酸 化技术，与传统的填充柱色谱相比，具有扩散路径 (Trp)(购自中国科学院上海生物化学研究所）,Ｌ蹋赖 短，质量传递效率高，压降小，通过量大的特点，使生 氨酸L（YS)购自上海康达氨基酸厂），人 －球蛋白 (HGG)(购自Serve公司），人血浆 购（自大连市中心 物大分子在柱内的保留时间短，减少了分离过程中 蛋白质变性的几率[4,5]因此自20世纪80年代末 血站），其余试剂均为国产分析纯试剂痢。 亲和分离在改装的AutomatedEconoSystem 出现亲和膜色谱技术以来，该技术已在实验室中应 (Bio-Red公司，美国）上进行。亲和膜(47mm）装 用于纯化酶、蛋白质、单克隆抗体等多种生物大分 填在Ｋ耍Ｆ系列膜分离器 （中国科学院大连化学物理 子，但由于膜基质和配基价格等因素的影响，使得亲 研究所专利产品）中亦（称之为膜堆）。752C型UV- 和膜色谱至今仍未实现工业化。 可见光分光光度计上（海第三分析仪器厂）用于蛋白 Gan等[]具有一定机械强度和均匀孔分布的 质浓度检测和凝血酶活性测定。DY-A型电泳仪 微孔尼龙膜，通过先水解再键合羟乙基纤维素的方 中（国科学院上海生物化学研究所西巴斯科学技术 法进行了改性，增加了膜的亲水性，并降低了非特异 开发公司）用于十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶 性吸附，得到了适用于亲和分离的膜介质。本文以 (SDS）电泳分析。 尼龙膜为基质，分别采用三氯三嗪和1,4-丁二醇二 2.2 亲和膜的制备 甘油醚两种活化方法，以价廉易得的氨基酸和肝素 将尼龙6平板膜先于室温下用1mol/L的HCl 为配基，制备了一系列亲和膜，并用其组装成平板膜 水解72h,然后用三氯三嗪[6,7］軧BDE郏［］莼化。将 堆。首次使用平板亲和膜方法从人血浆中快速纯化 用三氯