正交试验优选桑寄生中槲皮苷的提取工艺.DOCVIP

正交试验优选桑寄生中槲皮苷的提取工艺 苏本伟1,3，张协君1，朱开昕2，赵明惠2，裴河欢1，李静1，李永华3* （1.钦州市中医药研究所，广西 钦州 535000； 2.钦州市中医院，广西 钦州 535000；3.广西中医药大学药学院 广西 南宁 530001） 摘要：目的：筛选桑寄生中槲皮苷的提取工艺。方法：以甲醇浓度、甲醇量、超声时间、浸泡时间为考察因素，通过正交试验优选桑寄生中槲皮苷的提取工艺。结果：各试验因素对槲皮苷提取率的影响程度依次为：甲醇浓度甲醇量超声时间浸泡时间。经方差分析，综合各因素，确定槲皮苷的最佳提取条件为：取桑寄生药材粉末0.50 g精密加入75%甲醇溶液25 mL，浸泡1 h后超声处理45 min，槲皮苷提取率为8.6352 mg·g-1。结论：该提取方法操作简单、方便，为桑寄生槲皮苷提取工艺的进一步研究提供了依据。 关键词：桑寄生，槲皮苷，正交试验，提取工艺 桑寄生是一种半寄生性植物药材，药材为桑寄生科钝果寄生属广寄生Taxillus?chinensis (DC.) Danser的干燥带叶茎枝，并且以槲皮素定性检出作为桑寄生药材质量控制的重要指标，具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎元等功效[1]。前期研究结果表明桑寄生中游离槲皮素含量较少，主要以槲皮苷等形式存在，对桑寄生药材槲皮苷与槲皮素含量测定已有报道[2-3] ，但对桑寄生药材槲皮苷提取工艺研究尚未见文献报道。本文参照文献[4-6] 的方法，以槲皮苷含量为考察指标，采用正交试验优选桑寄生中槲皮苷的提取工艺。 1实验材料 1.1材料与试剂 槲皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111538–200403），甲醇(CNW,色谱纯)，水为超纯水，其它化学试剂均为分析纯。桑寄生药材采自钦州市中医药研究所桑寄生药材种植基地桑树上的寄生，药材原植物经中国科学院华南植物研究所丘华兴教授鉴定为广寄生Taxillus?chinensis (DC.) Danser。将采集的样品洗净阴干，粉碎过40目备用。 1.2 仪器与设备 —————————————————————————————————————————————— [基金项目] 国家自然科学基金项目：寄主植物对桑寄生药材质量影响评价研究；广西科技攻关项目：广西道地药材桑寄生院内制剂的研究与开发（桂科1-12）； [通讯作者] 李永华，博士学位，高级工程师，主要从事中药质量标准研究。Tel:(0771)3137535，Fax:(0771)3140360，E-mail:liyonghua185@126.com [作者简介] 苏本伟，在读研究生，助理工程师，主要从事中药质量标准研究、中药制剂研发。Tel:(0777)2878443，Fax:(0777)2878678，E-mail:tosubenwei@163.com 高效液相色谱仪(日本岛津公司, LC-20AT)，紫外检测器(日本岛津公司，SPD-20A) ， Agilent TC–C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），超声清洗器（KQ-300DB，昆山市超声仪器有限公司），分析天平（AND GH-252），可调式微量移液器（Thermo），0.45 μm微孔滤膜等。 2 实验方法与结果 2.1 槲皮苷含量测定方法 色谱条件：色谱柱为Agilent TC–C18柱，流动相：甲醇–0.1%磷酸溶液（52︰48）检测波长：254 nm，进样量：10 μL，流速：1.0 mg·mL-1，柱温：25 ℃。 对照品溶液制备：精密称取槲皮苷对照品3.50 mg置10 mL容量瓶加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.35 mg·mL-1的槲皮苷对照品溶液。 2.2 单因素试验 选取甲醇浓度、超声提取时间、提取溶剂量、浸泡时间四个单因素，确定其适宜的范围。 2.2.1甲醇浓度对槲皮苷提取效果的影响 固定超声提取时间为45 min，取桑寄生药材粉末0.50 g加入提取溶剂量为25 mL，采用不同浓度的甲醇溶液来提取槲皮苷，其结果见图1。 图1 甲醇浓度对槲皮苷提取效果的影响 由图1可以看出，当甲醇浓度为 75％(V/V)时槲皮苷提取效果最佳，故采用 75％甲醇溶液为宜。 2.2.2超声时间对槲皮苷提取效果的影响 取桑寄生药材粉末0.50 g加入甲醇溶液25 mL，采用不同超声时间来提取槲皮苷，其结果见图2。 图2 超声时间对槲皮苷提取效果的影响 由图2可知 ，随着超声时间增加，槲皮苷提取率也随之增加，而在45 min以后，槲皮苷