细菌实验诊断技术.精选课件.pptVIP

第六章 细菌实验诊断技术 与质量控制 坚持 细菌感染的检验：是指样品的采集送检、处理，运用表型和遗传学方法检查病原体的特征作出结果报告的全过程。 1.保持检验过程的阶段性、快速性和连续性 显微镜检查、分离培养、血清学实验、生化和分子生物学试验、药敏实验等。如能初步鉴定，可分别先后及时向临床提供信息。 第一节 细菌感染的检验原则 坚持 2. 根据诊断目的决定鉴定的水平 （1）病原学诊断→鉴定到细菌的种； （2）指导临床治疗→进行直接或间接药物敏感实验 （3）流行病学监控和调查→鉴定到型 （4）病原学研究、疗效监控→分子水平的检测 3. 了解检验对象的背景 （1）病人的背景 （2）标本的来源 坚持 1）尽早采集 一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，尽早获得病原学诊断和抗生素敏感资料，对细菌感染的治疗具有极其重要意义； 2）标本采集尽量在用药前进行； 3）根据可疑病原菌和实验方法的不同选择合适的采集时期； 【 例如】肠伤寒病程第1周采血培养阳性率最高，第2周开始下降；骨髓培养阳性率的趋势和血培养一致但始终高于血培养，且持续至第五周阳性率仍达52%；粪便培养阳性率在第2～4周最高。 4. 重视样品的采集和送检☆ 坚持 4）注意无菌操作，尽量避免杂菌污染； 5）注意采集的方法和部位； 6）标本必须新鲜，及时运送； 7）标本的保存、处理要严格。 5. 必须用纯培养物鉴定——选用单个菌落 坚持 1）选择有价值的试验：所选项目大结果可能为阴性/阳性，但阳性/阴性率应大于90%，否则无意义。 2）选择快速简便的项目：鞭毛染色、氧化酶、凝固酶、触酶、O/F等应做为首选项目。 3）一种试验有多种方法时，应了解不同试验的敏感性和特异性。 6. 鉴定实验的选择 坚持 第二节 细菌感染的检验程序和方法 临床标本 预处理 增 菌 接种培养基，分离单个菌落 各种鉴定试验 涂片染色 快速诊 断试验 生化试验 血清学实验 涂片染色 药敏试验 动物试验 初步诊 断报告 最终诊断报告 一、一般检验程序 坚持 2.染色标本染色 1）单染色法 2）鉴别染色法（复染色法 ）： 革兰染色（Gram stain，GS） 二、形态学检查—涂片染色 1.不染色标本检查 悬滴或压迹法，观察活细菌轮廓、动力等。 结晶紫1min 卢戈碘 1min 95%乙 醇30s 稀释复红 30s 坚持 血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。 病 种 标 本 方 法 结 果 鼠 疫 痰，腺穿刺液 GS，亚甲兰染色 G-两极弄染，多形态 霍 乱 水样便 GS，制动试验 G-弧菌，流星样运动 炭 疽 痰，渗出物 GS，亚甲兰染色/串珠试验 G+大杆菌，竹节状排列，有芽胞和荚膜 白 喉 假膜，咽拭子 GS，亚甲兰染色 G+棒状，异染颗粒/特殊排列 淋 病 尿道/阴道分泌物 GS G-双球菌，位于脓细胞内/外 流 脑 脑脊液、瘀血癍 GS G-双球菌，位于脓细胞内/外 肺结核 痰 抗酸染色 兰色背景中红色杆菌 梅 毒 病变渗出液 暗视野 白色折光活动的密螺旋体 坚持 三、分离培养 （一）培养基： 1.培养基的种类 坚持 2.调整培养基的pH； 2.培养基的配制 1.根据组成准确称取，混悬于装有蒸馏水烧瓶中，加热溶解； 3.过滤澄清 ； 4.分装 5.灭菌 6.质量检查 7.保存 坚持 （二）接种与分离技术 1.?? 接种工具 1）接种环和接种针 是细菌学实验必需的工具。 2）接种罩、无菌工作台、无菌室、生物安全柜 坚持 2.接种与分离技术 1）平板划线分离： 连续划线 放射划线 分区划线 坚持 2）斜面的接种： 3）半固体和液体培养基的接种： 坚持 坚持 1.温度： ——37℃、22℃、4℃、 42℃ （三）培养条件： 坚持 2.气体： 1）普通培养法 2）CO2培养 厌氧手套箱 烛缸 厌氧袋 厌氧罐 3）厌氧培养 CO2培养箱 坚持 四、生化试验 1.糖（碳水化合物）分解试验 坚持 2.氧化一发酵试验（O/F试验） 【原理】又称Hugh—Leifson（HL）试验。细菌在分解葡萄糖的过程中，必须以分子氧作为电子受体的，称为氧化型（O）；可以进行无氧降解的，称为发酵型（F），此类细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖；不分解葡萄糖的，称为产硷型（-）。 利用此试验可区