sepharose FF 产品介绍.docxVIP

Sepharose FF粒子交换剂 Sepharose FF离子交换剂在生物分子纯化中扮演着举足轻重的作用，广受欢迎，他们可靠的性质使其成为了无论是研究还是工业里蛋白纯化的首选。 Sepharose FF离子交换剂具有很多优势： 高吸附能力 高的化学和物理稳定性 快流速 可靠的和可再生的 简单有效的清洗方式 简便的HiPrepTM和HiTrapTM预装柱 可预知的放大效果 离子交换层析法 对于分离蛋白分子和多肽分子，离子交换层析法是最常用的也是百试不爽的方法，即使在吸附能力上有小小的不同。此外，其吸附和洗脱的条件是很容易优化的，并能产生快速分离的效果，还可再生，这些对于扩大规模生产都是很有经济效益的。 离子交换层析技术是基于带电荷分子与固定的带反电荷的离子交换剂之间的可逆反应，带电荷的分子在较低的离子强度下吸附在分离基质上，然后通过盐或pH的梯度将其洗脱下来。当需要好的分离度时，经常使用连续梯度洗脱，然而当进行样品制备，组份分离或者浓缩时得需要阶段洗脱。 Sepharose FF离子交换剂包括弱离子交换剂（DEAE，ANX CM）和强离子交换剂（Q，SP）。当pH改变时，弱离子交换剂的吸附置换能力比强离子交换剂容易发生改变，这个改变会影响其吸附选择性。相比之下，强离子交换剂配体在很广的pH范围类任然保持着置换和较高的容量的能力。 Sepharose FF离子交换剂 Sepharose FF离子交换剂包括SP Sepharose FF，CM Sepharose FF，Q Sepharose FF，DEAE Sepharose FF和ANX Sepharose FF。 DEAE，CM，Q和SP是基于6%的高交联度的球状琼脂糖模型，此特点使得其具有出色的流速特性外加较高的上载（loading）能力。在1bar的压力下，15cm高的填装柱中的线性流速可以达到300-400cm/h，这在纯化技术发展早期需要速度改进时时非常重要的，对于清洗和平衡，其流速甚至可以高到750cm/h。 ANX Sephrose 4 FF是基于4%交联度的琼脂糖，这种基质多孔，可用于高分子量蛋白的纯化，且同样拥有高流速。 阴离子交换剂 种类 特性 ANX Sephrose FF Q Sephrose FF DEAE Sephrose FF 凝胶结构 4%高度交联琼脂糖 6%高度交联琼脂糖 6%高度交联琼脂糖 基质类型 弱离子 强离子 弱离子 交换离子类型 强阳离子 强阴离子 弱阴离子 带电荷配体组份 -N+(C2H5)2H+ -N+（CH3）3 -N+H（CH2CH3）2 总离子置换能力 0.13-0.18mmol Cl-/ml基质 0.18-0.25mmol Cl-/ml基质 0.11-0.16mmol Cl-/ml基质 颗粒大小 90um（45-165um） 90um（45-165um） 90um（45-165um） 动态绑定吸附能力 43mg牛血清蛋白 /ml基质 120mg人血清白蛋白/ml基质 110mg人血清白蛋白/ml基质 pH稳定性 短期 长期 2-14 3-13 1-14 2-12 1-14 2-13 工作温度 4℃-30℃ 4℃-30℃ 4℃-30℃ 化学稳定性 都可用水缓冲液， 1M NaOH，8M 尿素，6 M盐酸胍，30%的异丙醇，70%的乙醇。 保存 20%乙醇 避免 氧化剂，阴离子洗涤剂和缓冲液 所有基质的化学性非常稳定并能耐受强烈的CIP清洗和清洁方式，他们的离子交换功能基团通过化学稳定的醚连接方式连接到基架上的。 上图为DEAE Sepharose FF pH范围内的滴定曲线，超过这个范围将会影响功能基团的电荷性质。 缓冲液的选择 正如前面所说的一样，离子交换层析技术是基于带电荷分子与固定的带反电荷的离子交换剂之间的可逆反应，带电荷的分子在较低的离子强度下吸附在分离基质上，然后通过盐或pH的梯度将其洗脱下来，所以为了避免缓冲液进入所引起的pH变化的对离子交换质量的影响，得选择一种和被置换的分子的带电性质（带电性质主要指其等电点的性质）相同的缓冲液。 化学稳定性 在有效的CIP清洗程序下，较高的化学稳定性使凝胶能在多次纯化周期后保持较高的再生率。同样的，定期的除菌能阻碍微生物的生长和保持较高的清洁水平。CIP和除菌都能促进较高的经济效益，所以当选择离子交换介质和预装柱的程序时，这两个都是重要考虑的因素。 对于CIP清洗，一般的使用0.5-1.0 M NaOH足以除去大部分的污染物质，尽管一些非常疏水性的分子会紧紧地吸附在介质上，但是使用有机溶剂如70%乙醇或者30%的异丙醇，或者更强的洗涤剂则能将其洗脱。 一般的CIP清洗和除菌对于SP Sepharose FF，CM Sepharose FF，Q Sep