刺参真核翻译起始因子基因eif2s1的cDNA克隆及表达分析-海洋科学.PDF

刺参真核翻译起始因子基因(eif2s1) 的 cDNA 克隆及表达分析 1 2 1 赵 业 , 杨红生 , 李秉钧 (1. 烟台大学 海洋学院, 山东 烟台 264005; 2. 中国科学院 海洋研究所, 山东 青岛 266071) 摘要: 夏眠是刺参(Apostichopus japonicas )应对夏季高温低氧等不良环境的重要生存策略, 而抑制高 耗能的蛋白合成则是夏眠期机体有效降低能耗的重要环节。真核翻译起始因子eIF2 是启动蛋白翻译的 关键因子, 在蛋白合成调控中发挥了重要作用。本研究克隆分析了刺参翻译起始因子eIF2α亚基(eif2s1 基因)全长 cDNA 序列及结构特征, 并测定了其在夏眠期间的时空表达模式。结果表明: 刺参eif2s1 基 因序列较保守, 与紫海胆该基因同源性最高。同时, 刺参eif2s1 基因在深度夏眠期组织中出现了不同程 度的表达抑制, 可能参与了刺参夏眠蛋白抑制调控。 关键词: 刺参; 夏眠; eif2s1 基因; 基因克隆; 实时定量PCR 分析 中图分类号: S917.4 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2018)04-0120-07 DOI: 10.11759/hykx20170921001 夏眠是动物应对夏季高温、干旱、低氧及食物 elF-2-GTP 三元复合物, 该复合物与游离的40S 核糖 匮乏等不良环境的重要生存策略, 广泛存在于脊椎 体小亚基结合后再与 mRNA 的 5′端相结合[9], 形成 动物和无脊椎动物中。动物进入夏眠, 随着摄食停止 了蛋白翻译必需的43S 前体起始复合物(PIC) 。研究 和呼吸速率大幅度下降, 体外能源获取和体内 ATP 表明, eIF-2 的α亚基可通过可逆磷酸化调控PIC 形 生成量均显著下降, 机体面临严重的能源危机。研究 成的速率, 是整个蛋白翻译起始过程的关键限速因 表明, 动物在夏眠期间代谢率大幅下降, 仅为正常 子。因而, eIF-2 因子很可能是阐明休眠期间蛋白翻译 时期的 10%~30%, 发生明显的代谢减退[1] 。此外, 为 调控机制的重要线索。目前研究表明, eIF-2 在蜗牛夏 了维持体内能量稳态平衡, 高耗能细胞活动在夏眠 眠和红耳龟低氧胁迫中均受到不同程度抑制[7, 10], 而 期间尤其受到强烈抑制。蛋白质合成作为胞内能量 海洋无脊椎动物在夏眠过程的相关研究领域尚未见 消耗的最主要事件, 每合成1 分子肽键就需水解4 分 报道。 子 ATP[2] 。因此, 抑制蛋白合成对于长期休眠动物的 刺参位列“海八珍”之首, 具有较高的营养和药 [3] 生存意义重大。已有研究证实, 在龟类的低氧胁迫 、 用价值, 是我国海水养殖产业中的重要经济物种[11] 。 [4] [5] [6-7] 鳉鱼胚胎的滞育 、哺乳动物的冬眠 及蜗牛夏眠 作为典型的温带物种, 刺参在夏季海水温度升高到 等过程中均出现了不同程度的蛋白合成抑制。 一定范围后会迁移到较深、较安静的海底环境不动 真核细胞的蛋白翻译是一个多步骤的复杂反应,