几种血涂片染色方法的比较.doc

PAGE PAGE 1 几种血涂片染色方法的比较 作者：张赛霞，张立群，吴绍锋作者单位：广州中医药大学，广东广州510006 　　血涂片染色广泛应用于医学检验和组织学教学片的制作。传统的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和WrightGiemsa混合法，作为医学检验以简单快捷为首选，而要制作教学标本，则对染色效果、标本存放时间要求更高，对此，我们对各种染色方法进行了长期的探索和比较，以期找到较稳定的、效果满意的染色方法用于制作大批量教学标本。 　　1材料与方法 　　1.1采集标本用消毒采血针头扎刺手指头或耳垂，滴取黄豆大小血滴于洁净载玻片上，推成均匀血膜，自然晾干，用甲醇固定2min~5min。大量制作教学标本可一次推出所需血膜，固定待用。 　　1.2染色 　　1.2.1Giemsa氏染色法将Giemsa原液(配制1年后)分别与pH6.4、6.6、6.7、6.8的磷酸盐缓冲液按1∶10的比例配成工作液；将固定好的血片分别滴染以上4种工作液，每种染液又分别染25min、30min、45min、60min，自来水冲洗、镜检。 　　1.2.2Wright氏染色法染液按传统方法预先配好，我们使用配制1个月后的Wright氏染液，用前用pH7的磷酸盐缓冲液稀释1倍，分别染5min、10min、15min，然后用自来水冲洗干净、镜检。 　　1.2.3Wright-Giemsa混合法取Giemsa原液1份、Wright氏原液5份、pH6.7的磷酸盐缓冲液6份配成染液，滴染10min、15min、20min，然后用自来水冲洗干净、镜检。 　　2结果 　　2.1Giemsa滴染用pH6.7的磷酸盐缓冲液配制的工作液染色45min的血片，红细胞呈桔红色，白细胞核呈紫蓝色，中性颗粒浅红色，嗜酸性颗粒桔红色，淋巴细胞胞质浅蓝色，单核细胞胞质灰蓝色，血小板紫蓝色。而pH＜6.7和染色时间较短者，则核染色偏红或难着色，pH＞6.7则核呈蓝色，嗜酸性颗粒颜色偏暗。 　　2.2Wright氏染液滴染染色15min，细胞核和血小板紫红色，其他结果与Giemsa滴染相似，染色时间过短则核难着色，时间过长，则易使染液挥发而造成污染。 　　2.3Wright-Giemsa混合染色细胞核呈紫蓝色，红细胞紫红色，其他结果与Wright氏滴染相似。 　　3比较与讨论 三种染色法均为传统染色法，各有优缺点：Giemsa氏染色法，染色过程易控制、不污染是其最大的优点，染色效果对染液pH值要求高，经过反复多次试验，以pH6.7染色效果最好，各种细胞的特性显示清楚，但染色时间长是其缺点，故此法较适于制作教学标本用；Wright氏染色法的优点是染色时间短，结果出现快，较适于临床检验，但其染色过程不易掌握、易污染是其缺点；WrightGiemsa混合法虽能对两种染法起互补作用，但染液变性快、易污染，也不适于教学标本染色。 　　4体会 各种涂片染色后，不要倾去染液，否则易使染液沉淀在片上；直接用自来水冲洗比用蒸馏水或缓冲液冲洗更方便、彻底，可通过调大水压及时冲去结合尚未牢固的染料沉渣。 　【参考文献】 　［1］杜桌民.实用组织学技术［M］.第2版.北京：人民卫生出版社，1998，4：9295. ［2］易家农.组织学与组织化学技术［M］.湖南医学院，1986：118122.