分子生物学方法检测Y染色体的AZF区域缺失.doc

PAGE PAGE 1 分子生物学方法检测Y染色体的AZF区域缺失 常东　曲颖波　刘锐　孙玲娣 作者单位：150001哈尔滨，哈尔滨医科大学附属第一临床医学院遗传与不育诊疗中心 [摘要]目的Y染色体的AZF缺失是造成男性无精、少精的重要因素，通过PCR方法可以从基因水平检测病人的病因。方法采患者外周血提取DNA，经PCR扩增后，采用100bp的分子量标准，产物进行聚丙烯酰氨凝胶垂直电泳。结果经PCR方法检测15例经确诊为无精、少精症患者的Y染色体微小缺失，有1例缺失SY87、SY143、DAZ三条带，2例缺失DAZ带。结论用PCR方法可以检测AZF的缺失，是一种有效而可靠的检测方法，适用于男性无精、少精症患者的诊断。 [关键词]Y染色体微小缺失；PCR；无精、少精症 DETECTTHEMICRODELETIONONY-CHROMOSOMEOFOLIGOZOOSPERMIAMALEBYPCRChangDong,QuYingbo,LiuRui,SunLingDi(departmentofGIVFinJointVentureChina-USACenterofthefirstafflictedhospitalofHarbinMedicalUniversity,Harbin，150001China) [abstract]ObjectiveThedeletionofazoospermiafactorgeneisaveryimportantfactortoresultinmenwitholigozoospermiaorazoospermia.ItiscanbedetectedbyPCRfromgenelevel.MethodsExtractDNAfromthepatients’peripheralblood.Weuse100bpmolecularweightladder.TheproductionsofPCRprocesspolyacrylamidegelsverticalelectrophoresis.ResultsWedetect15casespatientswhowerediagnosisoligozoospermiabyPCRtechnique.Onepatientmissallthreebands:SY87、SY143、DAZ.TwopatientsbothmissDAZband.ConclusionDetectthedeletionsofAZFbyPCRisanefficientandreliabletechnique.Itissuitabletodiagnosistheoligozoospermiaandazoospermia. [Keywords]microdeletionsofY-chromosome;PCR;oligozoospermia;azoospermia 在男女不孕不育症中，男性不育的因素约占40%。有文献报道：90%的男性不育症是由于生精功能障碍引起的，其中特发性生精障碍占60%，半数以上属原因不明者[1]。而Y染色体正常与否起着至关重要的作用，因此研究Y染色体的相关基因有重要的临床价值。 在少精症和无精症的男性患者中，Y染色体微缺失占20.5%，据对Y染色体遗传序列的研究证实，Y染色体上微缺失是引起男子不育的主要原因之一。Tiepolo和Zuffardi等于1979年发现在Yq11上存在着“无精子因子”（azoospermiafactor,AZF）[2]，它决定男性的精子生成。经实验证实，约13%的非梗阻性的少精或无精症患者是由于Y染色体长臂上的AZF缺失造成[3]，而随机选择的有生育能力的男子未见此缺失。这些缺失位于AZFa、AZFb,AZFc区域[3]（如图1所示），这些区域中含有很多基因，我们设计了一个实验，通过对每个区域接近中心的位点进行一次PCR扩增来研究三个AZF区的缺失情况。 1对象与方法 1.1对象 15例经查无精或少精的男性不育患者的外周血样本，并且经细胞遗传学检查Ｙ染色体无明显缺失。患者均为2002年6月至2003年6月因不育来本院男科就诊的患者，年龄在26～36岁之间。按照国际标准，无精症为精液中无精子；少精症为精子总数＜4000万或＜2000万/ml。正常人对照2名，男、女各1名，均有正常孕产史，年龄在26～36岁之间。 1.2方法 1.2.1DNA的提取抽取2ml静脉全血，置于EDTA-K3抗凝的真空采血管中，使用Gentra公司生产的puregeneDNA提取试剂盒，按照操作说明提取DNA。 1.2.2PCR引物　在AZFa区域，检测SY87基因；在AZFb区域，检测SY143基因；在AZFc区域，检测精子缺乏基因（azoospermia，DAZ）的外显子2。所有检测