GB/T 36875-2018猪瘟病毒RT-nPCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36875-2018 猪瘟病毒 RT-nPCR 检测方法 Method of RT-nPCR for detection of classical swine fever virus 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/T 36875-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和同农业农村部提而。 本标准向全同动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC 181）归仁｜ 。 本标准起草单位： 军事医学科学院军事兽医研究所、中同兽医药品监察所。 本标准主要起草人： 郭焕戚、王琴、徐璐、冯烨、张乾义、赵启祖、邹兴启、朱元源、涂长春。 I GB/ T 36875-2018 猪瘟病毒 RT-nPCR 检测方法 1 范围 本标准规定了猪瘟病毒特异的反转录－套式聚合陌链反应（RT-nPCR）方法的技术要求。 本标准适用于可能感染猪痛病毒的猪脏器、的｜液、粪便和细胞培养物中猪瘟病毒核酸的检测，可用 于猪瘾的诊断和监测。 本标准的猪瘾病毒 RT-nPCR 方法不能区分感染的猪痛病毒野毒株和｜免疫的疫苗株。 2 缩略i吾 下列缩略语适用于本文件。 DEPC： 焦碳酸二乙醋（diethylpyrocarbon ate) EDTA-2Na： 乙二胶四乙酸二铀（ethyl ene diaminetetraacetic acid disodium salt) RNA： 核糖核酸（ribonucleic acid) RT-nPCR： 反转录－套式聚合酶链反应（rev巳rse transcr iption and nested polymerase chain r cac- tion) 3 实验前准备 3.1 实验室条件 3. 1. 1 实验室分区 PCR 实验室分区包括核酸提取区、PCR 反应体系配制区一一配液区、扩增区、电泳区。 流程顺序为 核酸提取区→配液区→扩增区→电jJ}（区。 各区仪器和耗材专用。 3.1.2 实验室应配备的仪器及器材 3. 1.2. 1 仪器： H 级生物安全柜、台式高速冷冻离心机、普通冰箱（－20 ℃和4 ℃）、分析天平、PCR 扩增 仪、电泳仪、电jJ}（槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、组织研磨器、扁桃体采样器、微波炉、单道可调移 液器（2 p.L、10 (LL、 200 1.1 L、 1 000 p.L） 。 3.1.2.2 器材： 元菌注射器、｜｜良科剪、II良科慑、称量纸、棉拭子、灭菌牙签、500 mL 量筒、500 mL 锥形瓶、 一次性元RNA 陋吸头00 p.L、200 p.L、 1 000 ,uL) 、1. 5 mL 无RNA 隔离心管、0. 2 mL薄壁PCR 管。 3.2 化学药品及试剂 3.2.1 总 RNA 提取试剂 Trizol。 3.2 .2 TAE 电泳缓冲液的制备，配制方法见附录Ao 3.2 .3 1 %琼脂糖凝胶，配制方法见附录A。 3.2 .4 其他试剂： 200 U / vL M-MLV 反转录隅，5 ×M-MLV 缓冲液， 40 U/