群反应性抗体检测的临床应用.doc

PAGE PAGE 1 群反应性抗体检测的临床应用 　　【摘要】目的建立群反应性抗体（PRA）的检测方法，探究PRA的产生与异体输血及非溶血性输血反应（NHFTR）的关系。方法以60例健康成人外周血淋巴细胞作为群体淋巴细胞的来源，按照微量补体依赖淋巴细胞毒实验检测122例患者的PRA。结果（1）从未接受输血组PRA阳性百分率，男性为6.5%（3/46）;女性为29%（9/31）。（2）接受多次输血组PRA阳性百分率，男性为36.8%（7/19）;女性为61.5%（16/26）。（3）NHFTR发生率为12.3%（15/122），其中PRA阳性组为31.4%（12/35）;PRA阴性组为3.4%（3/87）。（4）12例PRA阳性患者接受去白细胞过滤血NHFTR发生率为0（0/12）。结论接受异体输血是产生PRA的致敏因数;NHFTR与PRA有直接关系;输去白细胞过滤血是预防NHFTR的有效方法。 　　关键词群反应性抗体非溶血性输血反应过滤 　　群反应性抗体（PRA）是一组抗人类白细胞抗原的抗体，主要是由于妊娠、器官移植、异体输血、感染等引起［1］，在临床除引起器官移植急性排斥反应，导致移植物失功外，常可以引起非溶血性输血反应（NHFTR）。随着输血技术的发展，对NHFTR的研究日益受到重视。为进一步了解NHFTR与PRA的关系，为临床预防NHFTR提供依据，本文对122例受血者的血清PRA进行回顾性检测，报告如下。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1研究对象122例患者为本院住院及肾透析病人。其中77例从未接受输血，男46例，女31例，45例接受5次以上输血，其中男性19例，女性26例。所有女性妊娠胎次大于1次。空腹采集静脉血3ml，分离血清保存于-40℃。 　　1.1.2试剂淋巴细胞分离液（上试二厂），RPMI-1640培养液（Gibco公司），Terasaki溶液（自配），小牛血清（杭州四季青生物工程技术研究所），5%曙红（上试三厂），12%甲醛，兔补体（上海市血站）。 　　1.1.3仪器倒置相差显微镜（OLYMPUSCK-2b），水平离心机（KUBOTA-2100），恒温箱，72孔Terasaki反应盒，重复分配器，六联重复定量加样器（TheRobbinsmultiplesyringedyspenser）250/5μl，六联喷射式可调定量加样器（Yorkinstru-ments）0～25μl。 　　1.1.4群体淋巴细胞采集60例健康成人外周血，用肝素钠抗凝，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，用Terasaki溶液稀释至2000个/μl。 　　1.2方法 　　1.2.1淋巴细胞活性用台盼兰做活体染色，加入甲醛固定，镜下观察着色细胞小于5%。 　　1.2.2PRA检测参照文献中微量补体依赖淋巴细胞毒实验方法［2］。首先建立群体淋巴细胞反应板，将60份淋巴细胞加到Terasak板中，每孔分别加1μl淋巴细胞悬液，5μl灭菌石蜡油，使之成为PRA检测细胞板。实验时，在每孔中加入1μl被检血清，22℃孵育30min，每孔加入兔补体5μl，22℃孵育60min，每孔加入3μl曙红，室温放置4～6min，再加入8μl甲醛，4℃静置2h，盖上盖玻片倒置相差显微镜下观察。 　　1.2.3PRA值计算观察各孔，若死细胞高于阴性对照20%以上判为阳性孔，PRA%=（阳性孔数/60）×100%，PRA%gt;40%判为阳性。 　　1.2.4NHFTR的判定［3］输血前无发热，输血中或输血后4h体温大于38℃，较输血前升高1℃以上，可伴有恶寒、寒战、出汗、皮肤潮红等症状，不能为患者病情所解释。 　　1.2.5统计学处理所得结果应用Concisestatistics统计软件进行X2检验。 　　2结果 　　2.1PRA检测结果122例患者血清PRA的检测结果见表1，PRA阳性率为28.7%（35/122）。其中77例从未受血者PRA阳性率，男性为6.5%（3/46），女性为29%（9/31），平均为15.6%（12/77）。45例曾受血者PRA阳性率，男性为36.8%（7/19），女性为61.5%（16/26），平均为51.1%（23/45）。从统计结果来分析，从未输血组男性与女性比较差异有显著性（X2=7.133，Plt;0.01），男性患者中从未输血组与曾输血组比较差异有显著性（X2=9.469，Plt;0.01），女性患者中从未输血组与曾输血组比较差异有显著性（X2=6.086，Plt;0.05），曾输血组男性与女性比较差异不明显（X2=2.680，Plt;0.05）。 　　2.2NHFTR与PRA的关系122例受血者NHFTR发生率为12.3%（15/122），其中PRA阳性组NHFTR发生率为31.4%（12/3