痰中结核杆菌的检查方法及结果分析.doc

PAGE PAGE 1 痰中结核杆菌的检查方法及结果分析 王毅1沈利2赵暾 1.重庆医科大学附属第二医院4000102.重庆市肺科医院4000003.重庆医科大学检验系400016 [摘要]目的分析比较痰涂片、痰培养及FQ-PCR检查结核杆菌对肺结核的诊断价值。方法痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌；痰培养；FQ-PCR检测痰中TB-DNA。结果浓集法较直接法阳性率有大幅提高，培养阳性率较低，FQ-PCR法敏感度最高且无假阳性。结论涂片检查结核杆菌应提倡用浓集法，FQ-PCR法检测TB-DNA可列入TB实验诊断的常规项目，涂片、培养及FQ-PCR同时检测可从不同方面满足临床需要。 [关键词]痰；结核杆菌；FQ-PCR MethodsofdetectingTBinthssputumandanalysisoftheresults Wangyi,shenli,zhaotun (thesecondaffiliatedhospitalofChongQingmedicaluniversity,400010,China) [Abstract]ObjectiveTocomparethediagnosticvalueofsmearing,culturingandFQ-PCRdetectingTBforpulmonarytuberculosis.MethodsTBwasdetectedbysmearingdirectlyorsmearingofconcentratedsputumandbysputumculturing.TB-DNAinthesputumwasdetectedbyFQ-PCR.Resultsthepositiverateofsmearingofconcentratedsputumisobviouslyhigherthanthatofsmearingdirectly.Thepositiverateofculturingmethodisrelativelylow.ThesensitivityofFQ-PCRisthehighestandthereisnofalsepositiveresultsintheFQ-PCR.ConclusionSmearingofconcentratedsputumwouldbethepreferredmethodtodetectTBinthesputum.DetectingTB-DNAbyFQ-PCRmaybeadoptedasaroutinelaboratoryitemofdiagnosingpulmonarytuberculosis.Itwillmeetclinicalneedsfromdifferentaspectstoadoptsmearing,cuturengandFQ-PCRtodetectTB. [Keywords]sputum;TB;FQ-PCR 检出痰中含有结核杆菌是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的重要依据。痰中结核杆菌的检测方法常规采用痰涂片及痰培养。涂片虽简单易行，但阳性率低，培养虽为金标准，但周期太长，均难以满足临床需要。近年来，作为直接检测分枝杆菌、种系鉴定和药敏试验的许多分子学方法得到长足发展，这些方法能将诊断时间从几周大大缩短到几天。其中，实时动态荧光定量PCR（FQ-PCR）因其技术成熟具有较高的灵敏度和特异性，已逐渐应用于临床。在FQ-PCR检测痰TB的应用中，痰标本的留取和前处理将直接影响检测的灵敏度和结果的准确性。本文采用胰酶消化法对痰标本进行处理，再行FQ-PCR检测，既提高了检出率，同时使定量结果更趋于准确。现报道如下。 1材料方法 1.1痰标本： 取自本院肺科及重庆市肺科医院的肺结核病人72例，非结核肺部疾患（肺炎、肺癌）38例。 标本收集：收集、清洗和灭菌处理一批带盖样本盒，交由护士并嘱咐病人自行留取痰标本，要求：①病人晨起后漱口，深咳出1～2口痰入样本盒，加盖送检。②样本应避免混入唾沫。③涂片镜检应有大量上皮细胞及尘细胞，否则重留。 1.2试剂： 胰酶：上海化学试剂公司； 2%NaOH：自配； 25mmol/LCaCL2：自配； FQ-PCR试剂盒：由深圳达尔安生物工程有限公司提供配套试剂盒，含DNA提取液，阴、阳性和临界值对照，定量阳模（拷贝数为107）。 1.3仪器 DNA扩增仪：日本Biometra型DNA扩增仪； 微量荧光检测仪：广州达安DA-620型微量荧光检测器； 分析软件：上海棱光技术有限公司DA-620数据处理软件包. 1.4方法 1.4.1胰酶消化液配制：称取10g胰酶溶于200ml蒸馏水（5%），用2%NaOH调PH至8.0，加25mmol/LCaCL22ml，混匀后成悬液。40C保存，用前370C水箱温育10分钟。 1.4