江南大学考研发酵工程微生物课堂笔记.pdfVIP

1 概述工业微生物育种方法 一、 传统育种方法 （一）以基因突变为理论基础的育种方法： （1）诱变育种： 微生物诱变育种是用人工诱变方法诱发微生物基因突变，通过随机筛 选，从多种多样的突变体中筛选出产量高、性能优良的突变体，并找出突变体的 最佳培养基和培养条件，使突变体在最适环境条件下大量合成目的产物。诱变、 筛选和改变环境因素是诱变育种的3 个重要环节。 （2 ）推理育种： 工业微生物推理育种是根据微生物代谢产物的生物合成途径和代谢调 节机制，选择巧妙的技术路线，通过人工诱发突变的技术获得改变微生物正常代 谢调节的突变株，从而人为地使目的产物选择性地大量合成和积累。推理育种的 特点是：打破了微生物代谢调节机制这一限制目的产物大量积累的天然屏障；它 的优点是：定向。工作量适中、效率高。 （二）以基因重组为理论基础的育种方法： （1） 杂交育种：杂交育种通过微生物杂交将不同菌株的遗传物质进行转移、交换、 重组，使不同菌株的优良特性集中于一个重组体中。通过杂交育种可以扩大变 异范围、改变产品的产量和质量，甚至创造出新产品。 包括常规杂交育种，原生质体融合，转导育种，转化育种等。 2 微生物分子育种技术 （一）重组DNA 技术：也称基因克隆，是将一个含目的基因的DNA 片段经体外操作 与载体连接，并转入到受体细胞，使之在受体细胞内扩增、表达的操作过程。 DNA 重组操作过程通常包括以下步骤:①含目的基因的DNA 片段的分离与 制备；②载体的构建；③含目的基因的DNA 片段与载体相连接；④将重组分子 送入受体细胞，并在其中复制、扩增；⑤筛选带有重组DNA 分子的转化细胞； ⑥鉴定外源基因的表达产物。 重组DNA 技术实施的4 个必要条件：工具酶，基因，载体和受体细胞。 （二）定向进化：是指在试管中进行的 “分子进化”，即在实验室人工控制的条件下 模拟和加速生物分子向特定目标进化的过程。其对象可以是蛋白质或多肽，也 可以是核酸和其他大分子，甚至是一些生物体中的小分子。它通过人工合成或 借助于重组DNA 技术，人为地制造大量的变异体，然后按照特定的需要和目的， 给予选择压力；或通过高通量筛选技术，将满足特定目的的分子筛选出来。 定向进化的过程包括构建文库和筛选两部分。 定向进化常用技术有：定点突变、易错PCR 、DNA 重排。 （三）基因组重排：基因组重排技术可以看成是一种细胞水平的体内定向进化技术， 可以用来改造细菌的基因组，实现表型的改良。经典杂交技术在每一代只有两 个亲本进行重组，而重排技术则具有多亲本杂交的优势，对细菌群体进行重复 的基因组重排可以有效构建新菌株的组合文库。 （四）代谢工程：利用DNA 重组技术修饰细胞中特定生物化学反应（代谢途径）或引 入新的生物化学反应，以提高特定代谢物的产量或改善细胞的其他性能的学科。 代谢工程的应用领域主要有：①提高细胞已有的化学物质的产量；②产生宿主细胞本身 不能合成的新物质；③扩展细胞的底物使用范围；④形成降解毒性物质的新催化活性；⑤修 饰细胞的其他生物学特性。 采取的策略主要有：①在现存途径中提高目标产物的代谢流；②在现存途径中改变其 物质流的性质；③利用已有途径构建新的代谢旁路。 3. 染色体：细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体， 是遗传物质 基因的载体。对于原核生物来讲，由于它没有严格意义上的细胞核，只有称为拟核的区域， 位于其中的遗传物质也通常被称为染色体。 基因：是指携带有遗传信息的DNA 序列（即基因是具有遗传效应的DNA 片段），也 称为遗传因子，是控制性状的基本遗传单位。基因通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带 的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。一般来说，真核多细胞生物体中的每个细胞都 含有相同的基因，但并不是每个细胞中的每个基因所携带的遗传信息都会被表达出来。不同 部位和功能的细胞，能