降解苄嘧磺隆的光合细菌PSB07.docVIP

PAGE 1776 生态环境 第17卷第5期（2008年9月） 张松柏等：一株降解苄嘧磺隆光合细菌的分离鉴定及其降解特性 PAGE 1777 生态环境 2008, 17(5): 1774-1777 Ecology and Environment E-mail: editor@ 基金项目：国家高技术发展计划（863）项目（2006AA10Z401）；国家“十一五”科技支撑计划项目（2006BAD17B08, 2006BAD08A08） 作者简介：张松柏(1980年生)，男，助理研究员，博士研究生，主要从事农药降解微生物研究。E-mail:zsongb@ 收稿日期：2008- 一株降解苄嘧磺隆光合细菌的分离鉴定及其降解特性 张松柏1,2，张德咏1,2，罗香文2，尹乐斌1，刘勇1,2*，程菊娥2，朱春辉2 1. 中南大学研究生院隆平分院，湖南 长沙 410125；2. 湖南省植物保护研究所，湖南 长沙 410125 摘要：从农药厂工业废水和污泥中富集分离到一株能降解苄嘧磺隆（Bensulfuron methyl）的光合细菌PSB07-6，根据分离菌株的细胞形态结构、活细胞光吸收特征、生理生化特征以及系统发育分析将该菌初步鉴定为沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）。高效液相色谱法(HPLC)测定该菌降解光合细菌培养基中苄嘧磺隆的能力，在pH为6.5的光合细菌培养基中培养5 d，对350 mg·L-1苄嘧磺隆降解率达25.03％，添加回收率为105%~112%。降解特性研究结果表明，该菌能以苄嘧磺隆为唯一碳源和氮源，降解最佳条件为30 ℃、pH 关键词：苄嘧磺隆；光合细菌；降解特性；生物修复 中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2008）05-1774-04 通过农药的使用，来提高单位面积粮食产量是21世纪农业的重要举措之一。而杂草防除在农作物生产中则起着关键性的作用。磺酰脲类除草剂以其超高效性为农药的发展开辟了一个新天地，其单位面积用量极低，每公顷仅以克计，生物活性高，除草效果好，对敏感植物无药害[1,2]。但是磺酰脲类除草剂选择性强，对不同作物的敏感性差异很大，在其应用过程中遇到残留药害和抗性问题，许多国家和地区目前不得不暂时禁用某些此类除草剂[3]。 目前，国内外对于该类化合物在环境中消减的研究，大多集中在对其化学代谢及理化影响因素方面，对于微生物降解途径及化学物的生物降解性方面尚无系统研究[4-5]。 从废水和污泥中分离到一株能降解苄嘧磺隆的光合细菌PSB07-6，并对其降解苄嘧磺隆的特性进行了初步研究。该研究工作为利用光合细菌菌剂在苄嘧磺隆生物修复中的应用提供一定理论依据。 1 材料和方法 1.1 培养基、试剂和主要仪器 光合细菌分离培养基（PSB培养基），MM培养基，参考文献[6]，选择培养基：在光合细菌分离培养基中不加碳源和氮源，加入一定质量浓度的苄嘧磺隆；以上试剂均为分析纯。 w=10％苄嘧磺隆WP，浙江天一农化有限公司；w=98%苄嘧磺隆标样，天津东方绿色技术发展有限公司。苄嘧磺隆残留检测由湖南省植物保护研究所农药残留检测室检测，农药残留检测试剂均为色谱纯。 HPLC（Waters 600，USA），JEXL-1230透射电子显微镜（日本电子公司，日本）, 分光光度计（Tu-1901,北京普析通用仪器有限责任公司）。 1.2 降解菌的筛选 降解菌的筛选采用富集培养分离[7]，筛选到能耐受400 mg·L-1苄嘧磺隆的光合细菌,命名为PSB07-6。 1.3 菌株的鉴定 1.3.1 传统的细菌鉴定方法 检测各种生理生化指标[8]。 1.3.2 电镜样品制备及观察 将活的细菌滴到具膜载网上，然后进行磷钨酸染色，TEM（transmission-scanning electron microscope）观察拍照。 1.3.3 菌体吸收光谱的测定 取1.5 mL培养5 d的光合细菌培养液，8 000 r·min-1离心洗涤3次，用w=0.9％生理盐水重悬浮，分光光度计300~900 nm扫描。 1.3.4 菌体16S rDNA序列的测定 细菌基因组提取采用上