保健食品中9种水溶性维生素的测定BJS16.doc

—— PAGE \* MERGEFORMAT4 — — PAGE \* MERGEFORMAT5 —— 附件4 保健食品中9种水溶性维生素的测定 BJS 201716 范围 本方法规定了保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的测定。 原理 试样经水提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。 试剂和材料 注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1甲醇：质谱级。 3.1.2甲酸：质谱级。 3.1.3氨水：含量26%。 3.1.4冰醋酸。 3.1.5 浓盐酸。 3.1.6氨水（1+5）：量取100 mL 氨水（3.1.3）缓慢倒入500 mL 水中，混匀。 3.1.7 盐酸（0.01 mol/L）：吸取9 mL 浓盐酸（3.1.5），溶于1000 mL 水中。吸取该溶液50 mL，用水稀释并定容至500 mL。 3.1.8 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。 3.1.9 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。 3.2标准品 维生素B1（硫胺素盐酸盐）、维生素B2、泛酸（泛酸钙）、维生素B6（吡哆醇）、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。 3.3标准溶液配制 3.3.1标准储备液（1 mg/mL） 维生素B1标准储备液：称取维生素 B1标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），用 0.01 mol/L 盐酸（3.1.7）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。 维生素B2、生物素、叶酸标准储备液：分别称取生物素、叶酸标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），加入30 mL氨水（3.1.6）溶解，甲酸调节pH值至7.0后，用水转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。 维生素B6、维生素B12、烟酸、烟酰胺、泛酸标准储备液：分别称取维生素B6、维生素B12、烟酸、烟酰胺和泛酸标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），用水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中。 3.3.2 空白基质溶液的配制 取空白试样按照试样制备方法（5.2）操作。 3.3.3基质标准工作液 维生素B1基质标准工作液：准确吸取维生素B1标准储备液（3.3.1）适量，用空白基质溶液（3.3.2）将其稀释成含量分别为0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL的基质标准工作液。 8种维生素基质混合标准工作液：准确吸取维生素B2、泛酸、生物素、维生素B6、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺标准储备液（3.3.1）适量，用空白基质溶液将其稀释成含量分别为0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL的基质混合标准工作液。 注：操作过程应在避光环境下进行。 3.4微孔滤膜：0.22 μm，有机相。 仪器和设备 4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 4.2 超声波清洗器。 4.3 分析天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。 分析步骤 5.1试样制备 将20粒片剂或胶囊试样粉碎后混匀，液体试样混合均匀。 5.2试样提取 准确称取混合均匀的试样2g（精确至0.01 g）于50 mL棕色容量瓶中，加入40mL水，超声10 min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀，上清液经微孔滤膜（3.4）过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。 注：操作过程应在避光环境下进行。 5.3 仪器参考条件 5.3.1 色谱条件 a）色谱柱： HSS T3柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当者； b）流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.1.8），B为0.1%甲酸甲醇溶液（3.1.9），洗脱梯度见表1； c）流速：0.3 mL/min； d）柱温：30℃； e）进样量：2 μL。 表1 洗脱梯度 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 99 1 3 99 1 5 5 95 8 50 50 10 99 1 15 99 1 5.3.2 质谱条件 a）电离方式：电喷雾正离子模式。 b）检测方式：多反应检测（MRM）。 c）雾化气压力：45psi。 d）离子喷雾电压：3500V。 e）干燥气温度：300℃。 f）干燥气流速：5 L/