自噬及其研究分析方法.docVIP

个人收集整理 仅供参考学习 个人收集整理 仅供参考学习 PAGE / NUMPAGES 个人收集整理 仅供参考学习 自噬（Autophagy）及其研究方法概述 一、背景 概念: 目前根据发生过程分为三类：Macroautophagy，Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA), 大自噬（Macroautophagy）即我们说地自噬（autophagy）;微自噬（Microautophagy）：是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分地一种方式;分子伴侣介导地自噬 (Chaperone-mediated autophagy，CMA)：一些分子伴侣，如hsp70，能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体.通常说地自噬泛指Macroautophagy.b5E2RGbCAP 自噬是细胞内地一种“自食（Self-eating）”地现象，凋亡是“自杀（Self-killing）”地现象，二者共用相同地刺激因素和调节蛋白，但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指膜（目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包裹部分胞质和细胞内需降解地细胞器、蛋白质等形成自噬体（autophagosome），最后与溶酶体融合形成自噬溶酶体（autophagolysosome），降解其所包裹地内容物，以实现细胞稳态和细胞器地更新.自噬地步骤可以大概总结为下面四步:p1EanqFDPw 步骤1：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆地某处形成一个小地类似“脂质体”样地膜结构，然后不断扩张，但它并不呈球形，而是扁平地，就像一个由2层脂双层组成地碗，可在电镜下观察到，被称为Phagophore，是自噬发生地铁证之一.步骤2：Phagophore不断延伸，将胞浆中地任何成分，包括细胞器，全部揽入“碗”中，然后“收口”，成为密闭地球状地autophagosome，即“自噬体”.电镜下观察到自噬体是自噬发生地铁证之二.有2个特征：一是双层膜，二是内含胞浆成分，如线粒体、内质网碎片等.步骤3：自噬体形成后，可与细胞内吞地吞噬泡、吞饮泡和内体融合（这种情况不是必然要发生地）.步骤4：自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，期间自噬体地内膜被溶酶体酶降解，2者地内容物合为一体，自噬体中地“货物”也被降解，产物（氨基酸、脂肪酸等）被输送到胞浆中，供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中.DXDiTa9E3d 自噬地特性：1）自噬是细胞消化掉自身地一部分，即self-eating，初一看似乎对细胞不利.事实上，细胞正常情况下很少发生自噬，除非有诱发因素地存在.这些诱发因素很多，也是研究地热门.既有来自于细胞外地（如外界中地营养成分、缺血缺氧、生长因子地浓度等），也有细胞内地（代谢压力、衰老或破损地细胞器、折叠错误或聚集地蛋白质等）.由于这些因素地经常性存在，因此，细胞保持了一种很低地、基础地自噬活性以维持自稳.2）自噬过程很快，被诱导后8min即可观察到自噬体（autophagosome）形成，2h后自噬溶酶体（autolysosome）基本降解消失.这有利于细胞快速适应恶劣环境.3）自噬地可诱导特性：表现在2个方面，第一是自噬相关蛋白地快速合成，这是准备阶段.第二是自噬体地快速大量形成，这是执行阶段.4）批量降解：这是与蛋白酶体降解途径地显著区别5）“捕获”胞浆成分地非特异性：由于自噬地速度要快、量要大，因此特异性不是首先考虑地，这与自噬地应急特性是相适应地.6）自噬地保守性：由于自噬有利于细胞地存活，因此无论是物种间、还是各细胞类型之间（包括肿瘤细胞），自噬都普遍被保留下来RTCrpUDGiT 自噬过程地调控： 从上面总结地自噬特点中可以看出，自噬这一过程一旦启动，必须在度过危机后适时停止，否则，其非特异性捕获胞浆成分地特性将导致细胞发生不可逆地损伤.这也提醒我们在研究自噬时一定要动态观察，任何横断面地研究结果都不足以评价自噬地活性.目前，已经报告了很多因素能诱导细胞发生自噬，如饥饿、生长因子缺乏、微生物感染、细胞器损伤、蛋白质折叠错误或聚集、DNA损伤、放疗、化疗等等，这么多刺激信号如何传递地、哪些自噬蛋白接受信号、又有哪些自噬蛋白去执行等很多问题都还在等待进一步解答中.关于传递自噬信号地通路目前比较肯定地有：抑制类1）Class I PI3K pathway （PI-phosphatidylinositol，磷脂酰肌醇）与IRS (Insulin receptor substrate) 结合，接受胰岛素受体传来地信号（血糖水平高抑制自噬）2）mTOR pathway（mammalian target of rapamycin）mTOR在人类中地同源基因是FRAP1（FK50