蓝藻球形体的分离培养及再生.PDF

维普资讯 Vo1．15 No．2 第 15卷 第 2期 水 生 生 物 学 报 ． 1991年 6月 ACTA HYDROBIOLOG 1CA S1N ICA 3une． 1991 蓝藻球形体的分离 、培养及再生 孔 繁 翔 黎 尚豪 (中国科学院永生生物研究所，武汉 43007Z) 提 要 在高渗溶液中，用 0．05％藩菌酶和 2--5reotol·l EDTA处理蓝藻柱孢鱼腥藻、多变鱼 腥藻和组囊藻细胞。5—8h后 ，70—90％的细胞转为对渗透压敏感的球形体 (Spheroplsst)， 又称原生质球 。研究了藻的不同培养条件对球形体形成率的影响。 测定了 EDTA 处理藻细 胞后外膜脂多糖的释放量。在高渗溶液中，藻细胞和经酶处理获得的球形体的光合放氧括性 明显下降，固氯种类的固氯括性失去。饲养层法、固体混合法和含有 0．5rag·l BA的液体 悬滴培养的柱孢鱼腥藻的球形体，9天后出现再生藻落；在固体混合法培养中获得了组囊藻球 形体的再生藻落。在第 4天的悬滴培养物中，可以看到球形体发生第一次细胞分裂。 再生藻 细胞和酶处理物中残留细咆的抗溶菌酶特性有差异。 关键词 球形体 ，再生 ，柱孢鱼腥藻，组囊藻 蓝藻作为自养的原核生物，其中一些种类的固氮、放氢及高蛋 白含量等性状的应用价 、● 值 日益受到重视。但蓝藻缺有性生殖，自发的遗传物质重组很少发生，通过转化进行基因 转移，一般频率较低。对蓝藻球形体的研究，进而采用细胞融合技术，这对研究蓝藻细胞 的生理、体细胞遗传 以及基因转移都是很有前途的方法。 有关蓝藻球形体的分离及代谢 活性测定和细胞学研究已有不少报道 。而球形体再生研究进展较慢。 用液体培养基 培养组囊藻球形体，8天后观察到不完整的细胞壁的出现 。本文分离蓝藻球形体 ，摸索 适合球形体培养的条件，以获得再生的蓝 藻细胞，为诱导蓝藻纽胞融合打下基础。 材 料 和 方 法 1．藻种及培养 藻种均 由本所藻种库提供。柱孢鱼腥藻和多变鱼腥藻 (Anabaenacy— lindricaand ．variabilis)用 Allen—Arnon无氮培养基培养；组囊藻 (Anacystishid． ulans)用 Allen-Arnon有氮培养基培养 ；粗大螺旋藻 ($pirulinamaxima)用 Zarrouk 培养基 ；鞘丝藻 (Lyngbyaspiralis)用 BBM 培养基培养；阿格曼藻 (Agmenellum qua— drupllcatum BG-1)用 Asp-2培养基 ；粘球藻 (Gloeocapsasp．)用 sE培养基 。 培养 方法为静置培养、通气培养和摇床培养。温度为 3O℃，光强为 25OO一40001x，同步诱导根 现在南京大学环境科学系工作 。 1988年 6月 7日收到。 维普资讯