2018届基因工程的操作程序科目讲解.pptVIP

4.β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白，想一想，应如何进行设计？ （1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA)。 （2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 （3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。 （4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β-珠蛋白。 类别 项目 ? 复制 ? 转录 场所 特点 模板 原料 酶 能量 碱基 配对 产物 细胞核 只有DNA的一条链 四种核糖核苷酸 RNA聚合酶 ATP A-U C-G T-A G-C 细胞核 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚合酶 ATP A-T C-G T-A G-C 两个双链DNA分子 一条单链mRNA 边解旋边复制， 半保留复制 边解旋边转录 (2010年北京海淀区抽查)下图是含某目的基因的DNA片段，据图回答下列问题。 (1)根据图示可知，若用EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶切割，则此DNA片段可有_____个限制酶切割位点，切割后共有____种____个切割末端。 (2)EcoRⅠ限制酶切割后形成的末端是　　　　末端，在图中用笔标出切割部位。 (3)如果要将用EcoRⅠ限制酶切割形成的目的基因片段导入受体细胞，一般需要_____作载体。其应具备的特点有：_____、___、___。 (4)E·coli DNA连接酶连接目的基因和载体时连接的是图中____(填字母)部位的化学键。 1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA 2、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是 A、某生物的全套基因就是一个基因文库 B、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物 体内，则这个生物就是一个基因文库 C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库 D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文库 A C 1、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便 方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应 2、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ A D 3、目的基因主要是指_______________的结构基因。获得目的基因的常见方法有三种：（1）从基因文库中获取目的基因，根据基因的_________序列，基因在________上的位置，基因的________产物mRNA，基因的_______产物蛋白质等获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因，该技术是一项在________完成的核酸合成技术，前提条件是有一段已知目的基因的________序列，以便于合成_________。（3）如果基因较小且核苷酸序列已知，可以通过____________方法。 编码蛋白质 核苷酸 染色体 转录 表达 体外 核苷酸 引物 人工合成 原核细胞基因的结构 启动子 基因间区 基因间区 基因间区 基因 B 基因 A 基因 C 编码区上游的 非编码区 编码区 编码区下游的 非编码区 终止子 编码区 非编码区 基因 能转录，编码蛋白质 不编码蛋白质,但能调控遗传信息的表达 编码区上游的 非编码区 编码区 编码区下游的 非编码区 真核细胞基因的结构 启动子 编码区上游的 非编码区 编码区 编码区下游的 非编码区 终止子 编码区 非编码区 基因 启动子 终止子 外显子 内含子 真核 原核 编码区中能编码蛋白质的序列 不编码区中编码蛋白质的序列 二、基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相